GUS染色
GUS染色的實驗?zāi)康氖菍χ参飿颖具M(jìn)行染色,因為絕大多數(shù)植物細(xì)胞內(nèi)不存在內(nèi)源GUS活性,因此GUS基因廣泛用作轉(zhuǎn)基因植物的報告基因。
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送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
【實驗原理】
GUS(β-glucuronidase,β-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一種報告基因,其表達(dá)產(chǎn)物β-葡萄糖苷酸酶是一種水解酶,能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質(zhì)的水解,它可以將5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,縮寫為X-Gluc)分解為藍(lán)色物質(zhì)。
(1)組織化學(xué)染色定位方法
(2)熒光法測定GUS活性
(3)分光光度法測定GUS活性
【實驗方法
以某植物樣本為例:
step1: 90%丙酮固定20min;
(丙酮(acetoue)涉透力很強(qiáng),能使蛋白質(zhì)沉流凝固,但不影響蛋白質(zhì)的功能基團(tuán)而保存鼻的活性,用于固定磷酸酶和氧化酶效果較好,因此可用于GUS染色前的固定,可防止GuS信號的擴(kuò)散。鐵點是固定快。滲透力強(qiáng),易使組織細(xì)胞收縮。保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)欠佳。一般4C下20分鐘為直)
Step2 : 加1 mL GUS洗液洗去丙酮,洗2遍:
Step3 : 加GUS染色液,冰上抽真空15-20 min;
Step4 : 37C放置,隔一陣觀察- -下,染上色了就進(jìn)行下面步驟:
Step5 : 吸出染色液,加入1mL 70%乙醇,停止染色反應(yīng)及脫色:
Step6 : 更換幾次乙醇直到脫色完全;
Step7 : 解剖鏡及顯微鏡拍照觀察
載玻片上加適量HCG透明液,用鑷子取出幼苗在透明液中鋪平,蓋上蓋玻片,解剖鏡觀察整株,顯微鏡觀察細(xì)節(jié)并拍照。
【交付標(biāo)準(zhǔn)】
1. 實驗報告
2. 真實實驗結(jié)果
3. 原始圖片
4. 實驗原始數(shù)據(jù)
5. 剩余物料在周期內(nèi)可返還(超過周期,不予返還)
【送檢流程】