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 ——檢測(cè)腫瘤組織樣本中的細(xì)胞凋亡水平

TUNEL檢測(cè)實(shí)驗(yàn)報(bào)告由普拉特澤生物給大家解答與分享，普拉特澤生物病理檢測(cè)平臺(tái)可承接各種病理檢測(cè)外包服務(wù)，包括檢測(cè)HE染色、油紅O染色、原位雜交等實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

采用TUNEL染色技術(shù)檢測(cè)腫瘤組織樣本中的細(xì)胞凋亡水平。
二、實(shí)驗(yàn)樣本及分組

1.實(shí)驗(yàn)樣本

備注：包括干預(yù)細(xì)胞用的相關(guān)試劑均按實(shí)驗(yàn)樣品登記，每行登記一個(gè)或一組獨(dú)立樣品。

2.實(shí)驗(yàn)分組
   樣本：腫瘤
   分組：實(shí)驗(yàn)組A32（2個(gè)），對(duì)照組（2個(gè)）

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組A32 1

實(shí)驗(yàn)組A32 2

對(duì)照組 1

對(duì)照組 2

                                 圖1 腫瘤組織的tunel染色示意圖 100 X
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

凋亡/陽性細(xì)胞呈深棕色。

與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組中的細(xì)胞凋亡水平明顯增加。 

五、實(shí)驗(yàn)材料

1.主要儀器

2.主要試劑

六、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180~200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上生物素標(biāo)記的dUTP，在DAB的存在下，產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈深棕色），從而可以通過顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況。
七、方法步驟

1.脫蠟

1)   65℃烤片2 h；

2)   二甲苯（I）中脫蠟10 min；

3)   二甲苯（II）中脫蠟10 min；

4)   100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

5)   100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯。

2.水化

1)   95%乙醇中水化5 min；

2)   85%乙醇中水化5 min；

3)   75%乙醇中水化5 min；

4)   蒸餾水中水化待用。

3.通透

1)   蛋白酶K修復(fù)：每個(gè)樣本上滴加100 μL蛋白酶K工作液，37℃反應(yīng)30 min；

2)   PBS浸洗3次各5 min。

4.標(biāo)記

1)   每樣滴加50μL的Tunel反應(yīng)混合物，37℃避光孵育60 min；

2)   PBS充分浸洗3次各5 min；

3)   每個(gè)樣本滴加50 μL converter-POD工作液，濕盒中37℃避光反應(yīng)30 min；

4)   PBS充分浸洗3次各5 min。

5.顯色

1)   根據(jù)說明書配制DAB顯色液；

2)   每個(gè)樣本滴加50 μL DAB顯色工作液，室溫顯色30 s；

3)   蒸餾水稍洗終止顯色。

6. 復(fù)染

1)   蘇木素染色30 s；

2)   流水沖洗2 min。

7.分化返藍(lán)

1)   1%鹽酸酒精分化2 s；

2)   流水沖洗切片5 min。

8.脫水

1)   蒸餾水過洗1~2 s；

2)   85%乙醇脫水5 min；

3)   95%乙醇脫水5 min；

4)   無水乙醇脫水5min；

5)   無水乙醇脫水5 min。

9. 透明

1)   二甲苯（I）透明5 min；

2)   二甲苯（II）再次透明5 min。

10.封片

1)   在石蠟切片的中央滴加適量中性樹膠，蓋上蓋玻片封固；

2)   在通風(fēng)櫥內(nèi)室溫晾干。

11.鏡檢

1)  顯微鏡下觀察拍照。

冰凍三尺，非一日之寒，普拉特澤致力于幫助廣大科研工作者解決TUNEL檢測(cè)實(shí)驗(yàn)過程中的問題，不但授人以魚，亦授人以漁。