細(xì)胞內(nèi)活性氧檢測
熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。細(xì)胞內(nèi)活性氧的升高是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志之一。
【實(shí)驗(yàn)流程】
Step1：制成單細(xì)胞懸液（組織樣本）
Step2：溶血（細(xì)胞樣本無需進(jìn)行此步驟）
Step3：離心去上清
Step4：調(diào)整細(xì)胞密度
Step5：加入相應(yīng)的熒光探針
Step6：孵育
Step7：洗滌后離心去上清
Step8：上機(jī)檢測
注意事項(xiàng)
1、為保證所得結(jié)果的可靠性，每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球檢測儀器的變異系數(shù)；
2、每次應(yīng)做陰性對照、陽性對照、質(zhì)控對照、以確保將各種試劑及操作過程對結(jié)果的影響降至最低；
3、細(xì)胞應(yīng)保持良好的活性狀態(tài)，否則對結(jié)果影響較大。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 運(yùn)輸條件 |
|---|---|---|
| 組織 | 離體后組織制成單細(xì)胞懸液，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 活細(xì)胞 | 樣本量：1*106個細(xì)胞/TEST，加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
| 血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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