細(xì)胞劃痕
遷移是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中必不可少的環(huán)節(jié)之一。多種物質(zhì)可剌激腫瘤細(xì)胞的遷移，如腫瘤細(xì)胞分泌因子、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)成分(FN、LN)以及一些癌轉(zhuǎn)移靶器官的代謝產(chǎn)物或分泌產(chǎn)物等生長(zhǎng)因子對(duì)腫瘤細(xì)胞有趨化作用，可使其發(fā)生定向運(yùn)動(dòng)。測(cè)定方法以細(xì)胞劃痕法和Transwell小室法為主。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
遷移是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中必不可少的環(huán)節(jié)之一。腫瘤細(xì)胞與母體瘤分離，穿越血管壁，侵襲周邊正常組織時(shí)，需要一定的運(yùn)動(dòng)能力。高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞通常具奮較強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)性。多種物質(zhì)可剌激腫瘤細(xì)胞的遷移，如腫瘤細(xì)胞分泌因子、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)成分(FN、LN)以及一些癌轉(zhuǎn)移靶器官的代謝產(chǎn)物或分泌產(chǎn)物等生長(zhǎng)因子對(duì)腫瘤細(xì)胞有趨化作用，可使其發(fā)生定向運(yùn)動(dòng)。測(cè)定方法以細(xì)胞劃痕法和Transwell小室法。
【技術(shù)原理】
細(xì)胞劃痕法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過(guò)不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：細(xì)胞培養(yǎng)
Step2：細(xì)胞接種于6孔板中
Step3：細(xì)胞轉(zhuǎn)染或藥物處理
Step4：劃痕
Step5：鏡檢
案例展示
2株肺癌細(xì)胞的Transwell侵襲能力檢測(cè)
技術(shù)總結(jié)
1、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)選擇6孔板進(jìn)行。
2、使用培養(yǎng)板前，應(yīng)事先在孔板背部用馬克筆畫(huà)上數(shù)條穿過(guò)孔板的平行橫線，便于之后的拍照定位。
3、細(xì)胞接種如6孔板時(shí)，密度應(yīng)選擇能使其在第二天融合度達(dá)到90%以上為宜。
4、對(duì)細(xì)胞層進(jìn)行劃痕時(shí)，用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜(不同孔之間最好使用同一只槍頭)。
5、劃痕后，PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，使劃痕區(qū)域干凈，再加入無(wú)血清培養(yǎng)基。
6、按時(shí)間點(diǎn)4倍鏡下進(jìn)行拍照，保證劃痕居中且垂直，注意背景一致。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細(xì)胞 | 1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化離心收集細(xì)胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)，凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個(gè)/ml。 2.項(xiàng)目啟動(dòng)后細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識(shí) |
| 復(fù)蘇后細(xì)胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運(yùn)輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時(shí)間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運(yùn)輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過(guò)特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無(wú)內(nèi)毒素，無(wú)蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無(wú)內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時(shí)間，且沒(méi)有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
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