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        大家好，今天普拉特澤生物帶大家學(xué)習(xí)的是——酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)。酵母雙雜是可以直接在細(xì)胞外檢測(cè)蛋白質(zhì)交互作用的方法，也是普拉特澤生物分子檢測(cè)平臺(tái)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)之一。普拉特澤分子檢測(cè)平臺(tái)專業(yè)代做酵母雙雜實(shí)驗(yàn)，積累了大量的實(shí)操經(jīng)驗(yàn)與理論，今天就把我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中總結(jié)的所有注意事項(xiàng)全部分享給大家！

        1、如果誘餌蛋白對(duì)酵母細(xì)胞是有毒的，該怎么辦？

        在某些情況下，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)不好的菌珠可以在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)得很好。首先重懸克隆于1mL的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于5個(gè)100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5mL0.5XYPDA刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個(gè)細(xì)胞重懸液進(jìn)行正常的雜交反應(yīng)。

        2、如果誘餌蛋白存在自激活，該如何處理？

        該蛋白很可能帶有完整的AD區(qū)和BD區(qū)，是個(gè)完整的轉(zhuǎn)錄因子，可以將轉(zhuǎn)錄因子基因分成兩部分分別進(jìn)行文庫(kù)篩選，然后重新檢測(cè)其是否自激活，但要注意切割也有可能破壞蛋白之間的相互作用。

        3、轉(zhuǎn)化效率太低怎么辦？

        1) 檢測(cè)感受態(tài)細(xì)胞效率，標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范。 2) 注意質(zhì)粒使用量，檢查儀器狀態(tài)。 3) 重新配制新鮮培養(yǎng)基，并做對(duì)照轉(zhuǎn)化。

        4、如果誘餌蛋白對(duì)酵母細(xì)胞是有毒的，該怎么辦？

        在某些情況下，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)不好的菌珠可以在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)得很好。首先重懸克隆 1mL 的 SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于 5 個(gè) 100-mm 的 SD/–Trp 平板，在 30下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用 5mL 0.5X YPDA 刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個(gè)細(xì)胞重懸液進(jìn)行正常的雜交反應(yīng)。

        5、雜交效率不高，該如何處理？

        在雜交中，預(yù)轉(zhuǎn)化的誘餌細(xì)胞的數(shù)量可能不夠。當(dāng)對(duì)誘餌菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)過夜時(shí)，應(yīng)挑選大的、新鮮的克隆進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過離心和重懸后，再使用血球計(jì)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。密度應(yīng)該在 1 x 109/mL。 一個(gè)甚至兩個(gè)融合蛋白對(duì)酵母細(xì)胞有毒。你可以通過重組方法來(lái)減輕毒性，同時(shí)又能保證蛋白的相互作用?；蛘呤褂帽磉_(dá)水平較低的載體。也可以在瓊脂平板或?yàn)V膜上進(jìn)行雜交。但同時(shí)必須作雜交對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

        好啦，那關(guān)于酵母雙雜實(shí)驗(yàn)操作的注意事項(xiàng)我們就先總結(jié)到這里啦，如果您也對(duì)酵母雙雜技術(shù)感興趣，或者正準(zhǔn)備做酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)的話，可以同時(shí)根據(jù)本文和上篇的酵母雙雜操作步驟一起參考設(shè)計(jì)步驟和實(shí)驗(yàn)。如果需要的酵母雙雜外包的話，可以直接給客服留言，普拉特澤生物當(dāng)仁不讓~