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   雙熒光素酶報(bào)告基因實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介與原理由普拉特澤生物技術(shù)人員生物為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物憑借承接多年的雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)練就了一身過(guò)硬的實(shí)驗(yàn)操作技能，有了現(xiàn)在雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)快、技術(shù)高、周期短的分子檢測(cè)平臺(tái)，為廣大生物醫(yī)學(xué)研究者提供雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)外包等幾十種分子互作實(shí)驗(yàn)外包。本文我們就從雙熒光素酶的實(shí)驗(yàn)的簡(jiǎn)介和原理來(lái)給大家詳細(xì)解釋。

   熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中最有代表性的是一種學(xué)名為Photinus pyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒(méi)有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢，而鈣離子的存在常?？梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。

   雙熒光素酶報(bào)告基因用于實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中作相關(guān)的或成比例的檢測(cè)，通常一個(gè)報(bào)告基因作為內(nèi)對(duì)照，使另一個(gè)報(bào)告基因的檢測(cè)均一化。檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雙報(bào)告基因通常用來(lái)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞，帶有實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因的載體共轉(zhuǎn)染帶有不同的報(bào)告基因作為對(duì)照的第二個(gè)載體。通常實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因偶聯(lián)到調(diào)控的啟動(dòng)子，研究調(diào)控基因的結(jié)構(gòu)和生理基礎(chǔ)。報(bào)告基因表達(dá)活力的相對(duì)改變與偶聯(lián)調(diào)控啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活力的改變相關(guān)，偶聯(lián)到組成型啟動(dòng)子的第二個(gè)報(bào)告基因，提供轉(zhuǎn)錄活力的內(nèi)對(duì)照，使測(cè)試不被實(shí)驗(yàn)條件變化所干擾。

   通過(guò)這種方法，可減少內(nèi)在的變化因素所削弱的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，比如，培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目和活力的差別,細(xì)胞轉(zhuǎn)染和裂解的效率。理想的雙報(bào)告基因方法應(yīng)該使用戶能夠以螢火蟲熒光素酶所具有的速度,靈敏和線性范圍對(duì)同一樣品中的兩個(gè)報(bào)告基因同時(shí)測(cè)定。

   這在傳統(tǒng)的報(bào)告基因，如CATB-Gal和GUS是不可能的，由于它們測(cè)試化學(xué),處理要求所固有的局限。相反，結(jié)合螢火蟲(Photinuspyralis)和海洋腔腸(Renilla reniformis)雙熒光素酶的系統(tǒng)可滿足這些要求，在單管中完成這些測(cè)試。

   雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)原理為：雙螢光素酶報(bào)告基因載體上含有兩種熒光素酶基因，分別是螢火蟲熒光素酶基因和海腎熒光素酶基因，二者沒(méi)有序列同源性，并且分別對(duì)應(yīng)各自的反應(yīng)底物，消除了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的干擾。在檢測(cè)的過(guò)程中，由于miRNA主要作用于靶基因的3'UTR，所以將靶基因mRNA的3'UTR和定點(diǎn)突變靶點(diǎn)的片段插入至雙熒光素酶基因載體下游的多克隆位點(diǎn)(MCS)中，并將構(gòu)建好的重組載體質(zhì)粒與miRNA或miRNA 模擬物(miRNA mimics)共轉(zhuǎn)染到工具細(xì)胞中，檢測(cè)螢光素酶的活性變化，從而可以定量反映miRNA是否對(duì)潛在靶基因起作用。以此來(lái)確定轉(zhuǎn)染載體中是否含有miRNA的靶位點(diǎn)。
   好啦，關(guān)于雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)基礎(chǔ)知識(shí)和原理的介紹就到這里啦，有更多不懂的同學(xué)歡迎留言咨詢哦，更有需要雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)外包的同學(xué)歡迎聯(lián)系。

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