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CHIP、RIP、COIP有什么區(qū)別?——CHIP/RIP/COIP檢測外包

2022-03-05 16:25:22

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

   CHIP 染色質(zhì)免疫共沉淀、 RIP RNA結(jié)合免疫蛋白沉淀、 CO-IP 免疫共沉淀的區(qū)別與不同由普拉特澤生物的分子檢測平臺實驗室總結(jié)分享,從定義、檢測方法、研究目的等三個方面來給大家詳細解釋,普拉特澤承接線下包括分子、細胞、組織染色等各項生物科研實驗外包服務(wù),同時旗下科研培訓(xùn)品牌《春風(fēng)學(xué)院》還為廣大科研人員提供線上下實驗技術(shù)培訓(xùn),come everybody !一起學(xué)習(xí)吧。

   首先我們來看看,什么是IP(免疫沉淀)技術(shù)?

   IP技術(shù)免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集樣品中目的蛋白的一種方法。通常使目標蛋白同抗體-protein A/G形成免疫復(fù)合物沉淀而得以收集。

   根據(jù)不同種類的檢測目標,我們可以將IP技術(shù)分為:CHIP、RIP、ChIP。

   IP富集蛋白,檢測與其結(jié)合的DNA的方法即為ChIP;

   IP富集蛋白,檢測與其結(jié)合的RNA的方法即為RIP;

   IP富集蛋白,檢測與其結(jié)合的蛋白的方法即為COIP

   
   接下來就一一介紹這個
IP家族的3兄弟:

   ChIP(染色質(zhì)免疫沉淀法):

   染色質(zhì)免疫沉淀法 (ChIP)是一種基于抗體的技術(shù),可用來選擇性地使DNA 結(jié)合蛋白及其 DNA 靶標富集。ChIP 可用來研究某種特殊的蛋白-DNA 相互作用、多種蛋白-DNA 相互作用或全基因組或部分基因內(nèi)的相互作用。通常,ChIP 用來檢測某種特異蛋白或某種特異蛋白修飾在某個基因組區(qū)域的相對豐度。并依賴于使用一種抗體從細胞或組織提取物蛋白混合物中分離某種蛋白、組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子或輔因子及其結(jié)合的染色質(zhì),或使之沉淀。因此,這種技術(shù)的名稱為:染色質(zhì)免疫沉淀法。在 ChIP-PCR 或 ChIP-seq 中,使用廣泛提供的 PCR 或 qPCR 試劑和下一代測序 (NGS) 技術(shù)便能檢測和定量免疫富集的 DNA 片段。ChIP 可以用來回答大量涉及蛋白和染色質(zhì)相互作用的科學(xué)問題。例如,ChIP 可用來比較某些蛋白在各位點上的存在情況,繪制某個目的基因組區(qū)域內(nèi)的各種蛋白圖,或定量能夠在受到刺激一段時間后結(jié)合誘導(dǎo)基因的蛋白。


   RIP(RNA免疫沉淀法):

   RIP技術(shù)(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀),是研究細胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù),是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動態(tài)過程的有力工具,能幫助我們發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)節(jié)靶點。RIP這種新興的技術(shù)運用針對目標蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來,然后經(jīng)過分離純化就可以對結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀ChIP技術(shù)的類似應(yīng)用,但由于研究對象是RNA-蛋白復(fù)合物而不是DNA-蛋白復(fù)合物,RIP實驗的優(yōu)化條件與ChIP實驗不太相同(如復(fù)合物不需要固定,RIP反應(yīng)體系中的試劑和抗體絕對不能含有RNA酶,抗體需經(jīng)RIP實驗驗證等等)。RIP技術(shù)下游結(jié)合microarray技術(shù)(微陣列)被稱為RIP-Chip,幫助我們更高通量地了解癌癥以及其它疾病整體水平的RNA變化。

   CoIP(免疫共沉淀法):   

   免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)是利用抗原與抗體之間的專一性作用,用于研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的經(jīng)典方法。利用免疫共沉淀可以檢測兩個已知蛋白之間的相互作用,或者利用已知蛋白尋找與之相互作用的未知蛋白。是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的蛋白一同隨免疫復(fù)合物沉淀,可以檢測兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)存在相互作用,也可以確定一種蛋白在體內(nèi)的相互作用蛋白。免疫共沉淀的設(shè)計理念是,假設(shè)一種已知蛋白是某個大的蛋白復(fù)合物的組成成員,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個蛋白復(fù)合物從溶液中“拉”下來(常說的“pull-down”),進而可以用于鑒定這個蛋白復(fù)合物中的其他未知成員。免疫共沉淀的特點可以概括為兩點,第一是天然狀態(tài),第二是蛋白復(fù)合物。



COIP 蛋白互作


   那么到這里關(guān)于chip、rip、coip的區(qū)別于不同我們就講完啦,大家都學(xué)會了嗎?歡迎踴躍留言補充其他的區(qū)別或者留下你的問題給客服,咱們技術(shù)會給到很細致的回復(fù)哦。