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        大家好！今天普拉特澤跟大家一起學(xué)習(xí)一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)——RNA pulldown，RNA pull-down是檢測(cè)與RNA（如 miRNA、lncRNA）相互作用的未知蛋白的重要技術(shù)之一。普拉特澤生物分子檢測(cè)平臺(tái)為廣大科研人員提供RNA pull-down代做服務(wù)，給您最專(zhuān)業(yè)真實(shí)的科研協(xié)助，本文來(lái)跟大家一起詳細(xì)看看，什么是RNA pull-down實(shí)驗(yàn)~

        RNA pull down是用于檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間互作的實(shí)驗(yàn)手段。RNA pull down使用體外轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記生物素RNA探針，然后與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。該復(fù)合物可與鏈親和素標(biāo)記的磁珠結(jié)合，從而與孵育液中的其他成分分離。復(fù)合物洗脫后，通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特定的RNA結(jié)合蛋白是否與RNA相互作用。也可以通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行未知的互作蛋白鑒定。

        蛋白質(zhì)與RNA的相互作用是許多細(xì)胞功能的核心，如蛋白質(zhì)合成、mRNA組裝、病毒復(fù)制、細(xì)胞發(fā)育調(diào)控等，了解它們之間相互作用的分子機(jī)制對(duì)理解這些生物學(xué)過(guò)程非常重要。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此用生物素標(biāo)記核酸后，利用生物素和鏈霉親和素之間的親和作用，可以純化出各種生物大分子復(fù)合物。

        那么RNA pull-down主要是有什么應(yīng)用呢？

        癌癥腫瘤相關(guān)調(diào)控機(jī)制研究LncRNA發(fā)揮功能的方式很廣，可以與蛋白、DNA和RNA相互作用，參與多種生物學(xué)過(guò)程的調(diào)控。主要包括基因組表觀(guān)遺傳修飾、調(diào)控轉(zhuǎn)錄后翻譯、發(fā)揮ceRNA、增強(qiáng)子RNA作用等，從而對(duì)細(xì)胞的增殖、分化、遷移、凋亡、免疫等發(fā)揮調(diào)控作用。 lncRNA能夠通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞糖代謝、谷氨酰胺代謝和脂類(lèi)代謝途徑中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行調(diào)節(jié)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取增加、谷氨酰胺分解增強(qiáng)及脂質(zhì)生成增加，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

        目前，大多數(shù)lncRNA在腫瘤細(xì)胞能量代謝中的功能和調(diào)控機(jī)制尚不完全清楚，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)和了解腫瘤細(xì)胞中與lncRNA相關(guān)的能量代謝異常表現(xiàn)出的惡性生物學(xué)行為，將有助于為腫瘤的診斷和治療提供有效的證據(jù)及新的思路和途徑。

        環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）是近來(lái)研究很熱門(mén)的一種特殊的長(zhǎng)鏈非編碼RNA。研究發(fā)現(xiàn)，circRNA 在人體細(xì)胞中廣泛表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄后水平具有調(diào)控基因表達(dá)的重要功能，并且參與多種腫瘤和其他疾病的病理發(fā)展過(guò)程。 circRNA大多由外顯子序列組成，呈閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，性質(zhì)穩(wěn)定，高度保守性，通過(guò)微小RNA“海綿”作用調(diào)控靶基因表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。這些特性使circRNA有潛力成為腫瘤新型分子診斷標(biāo)志物。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性與腫瘤相關(guān)微小RNA的結(jié)合，可以開(kāi)發(fā)針對(duì)circRNA分子靶點(diǎn)的靶向治療藥。因此,circRNA在腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中意義巨大。

        多種人類(lèi)疾病研究 RBPs在轉(zhuǎn)錄后水平參與調(diào)控mRNA穩(wěn)定性、LncRNA活性、應(yīng)激、腫瘤發(fā)生發(fā)展、細(xì)胞凋亡等眾多生物學(xué)過(guò)程，且與諸多人類(lèi)疾病密切相關(guān)。因此，對(duì)RBPs-RNAs相互作用網(wǎng)絡(luò)的研究和鑒定有重要意義。但由于RBPs作用方式復(fù)雜、功能多樣性、作用空間位置多樣化等原因，對(duì)其開(kāi)展精確研究一直是一個(gè)重大挑戰(zhàn)。RNA領(lǐng)域，尤其是非編碼RNA研究的快速發(fā)展，催生了多種RBPs-RNAs相互作用鑒定技術(shù)。

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