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        酵母雜交常見問題試劑篇由普拉特澤生物技術(shù)為大家總結(jié)分享，酵母雜交是可以體外研究蛋白與DNA、蛋白與蛋白相互作用的技術(shù)方法，也是普拉特澤生物分子檢測平臺的常規(guī)實驗之一，技術(shù)在承接的上百例酵母雜交實驗外包服務(wù)中積累了大量的經(jīng)驗，今天就把我們在實驗過程中遇到的和大家經(jīng)常提到的技術(shù)問題都分享給大家，快點做筆記吧！

        問題一：經(jīng)典轉(zhuǎn)化試劑盒和Super轉(zhuǎn)化試劑盒是否需要準(zhǔn)備其它試劑？

        答：需要準(zhǔn)備DMSO，無菌水或者無菌生理鹽水，無需其它試劑。

        問題二：50% PEG3350溶液是否可以高壓滅菌？

        答：經(jīng)過Coolaber檢測，PEG3350高壓滅菌可以用于酵母轉(zhuǎn)化，但過濾除菌的PEG有更高的轉(zhuǎn)化效率。高壓滅菌可能會導(dǎo)致PEG分子量或濃度發(fā)生變化，從而影響轉(zhuǎn)化效率。建議選擇過濾除菌PEG溶液。

        問題三：50% PEG溶液過濾除菌太慢是否正常？

        答：50% PEG粘稠，針頭濾器過濾太慢，可選用大面積的真空抽濾設(shè)備除菌。

        問題四：Carrier DNA是否需要預(yù)變性處理以及處理方法？

        答：Coolaber的Carrier DNA已經(jīng)做過變性處理?；诒ＷC轉(zhuǎn)化效率的目的，產(chǎn)品使用前可以再次變性處理。建議分裝至PCR管內(nèi)，于PCR儀（設(shè)置98℃ 10 min，4℃ 2 min）處理后冷凍保存。變性Carrier DNA可以反復(fù)凍融三次，超過三次需要再次變性處理。

        問題五：Carrier DNA是否可以由鮭魚精DNA制備以及制備方法？

        答：可以。但是制備方法復(fù)雜，需要溶解，剪切并測定分子量大小，制備方法參照分子克隆。

        問題六：YPD Plus Liquid Medium的作用是什么？

        答：YPD Plus Liquid Medium用于酵母轉(zhuǎn)化后的復(fù)蘇培養(yǎng)，經(jīng)Coolaber檢測，在增加復(fù)蘇培養(yǎng)步驟后，轉(zhuǎn)化子的數(shù)量可以增加50%-100%，在文庫轉(zhuǎn)化中作用明顯。但在互作驗證或單個質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實驗中，經(jīng)典轉(zhuǎn)化Kit或Super轉(zhuǎn)化Kit的轉(zhuǎn)化效率完全可以滿足實驗要求。YPD plus營養(yǎng)豐富，極易污染，產(chǎn)品包裝為4×25 mL形式，長期不用請置于-20℃保存。

        問題七：酵母轉(zhuǎn)化PEG/LiAC混合液的成分和用途？

        答：酵母轉(zhuǎn)化PEG/LiAC混合液（CAT：YT0006）由50% PEG、1M LiAC、10×TE按照8:1:1組成。按照每100 μL感受態(tài)細(xì)胞加入500 μL混合液進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，具體方法可以參照Coolaber釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的使用說明。

        問題八：1×TE/LiAC混合液（即用型）的成分和用途？

        答：1×TE/LiAC混合液（即用型，CAT：YT0009）與通常說的1.1×TE/LiAc濃度一致，成分為110 mM LiAC及1.1×TE。主要用于制備酵母感受態(tài)細(xì)胞，具體可以參照SK2400或SK2401的使用說明。

        問題九：菌落轉(zhuǎn)化Kit（SK2390）在什么情況下可以使用？

        答：菌落轉(zhuǎn)化Kit可以滿足大多數(shù)單個或者兩個載體轉(zhuǎn)化的實驗，在菌落數(shù)滿足要求的條件下，每μg質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后會得到50個以上的轉(zhuǎn)化子。

        好啦，關(guān)于酵母雙雜實驗常見問題試劑篇我們就解釋道這里啦，如果您還有其他的問題可以看看上篇的《酵母雜交實驗——轉(zhuǎn)化篇》，有酵母雜交實驗外包需求的老師歡迎直接留言，普拉特澤技術(shù)會第一時間回復(fù)到您！

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