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  周五好！今天普拉特澤跟大家一起來介紹一個新的實驗——酵母單雜交實驗。酵母單雜交技術是一種研究蛋白質和特定DNA序列相互作用的技術方法，普拉特澤生物分子檢測平臺為廣大科研工作者提供酵母單雜實驗外包服務，今天就跟大家一起來看看酵母單雜交的簡單介紹！

  酵母單雜交技術最早是1993年由Li等從酵母雙雜交技術發(fā)展而來，通過對報告基因的表型檢測，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細胞內的基因表達調控。由于酵母單雜交方法檢測特定轉錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和可靠性，現(xiàn)已被廣泛用于克隆細胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的特定轉錄因子。

  酵母單雜交的基本操作過程主要包括：

  1、設計含目的基因(稱為誘餌)和下游報告基因的質粒，并將其轉入酵母細胞。

  2、將文庫蛋白的編碼基因片段與GAL4轉錄激活域融合表達的cDNA文庫質粒轉化人同一酵母中。

  3、若文庫蛋白與目的基因相互作用，可通過報告基因的表達將文庫蛋白的編碼基因篩選出來。在這里作為誘餌的目的基因就是啟動子DNA片段，文庫基因所編碼的蛋白就是啟動子基因結合蛋白。

  酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據DNA結合蛋白(即轉錄因子)與DNA順式作用元件結合調控報告基因表達的原理，克隆與靶元件特異結合的轉錄因子基因(cDNA)的有效方法。其理論基礎是：許多真核生物的轉錄激活子由物理和功能上獨立的DNA結合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉錄激活區(qū)(Activation domain AD)組成，因此可構建各種基因與AD的融合表達載體，在酵母中表達為融合蛋白時，根據報道基因的表達情況，便能篩選出與靶元件有特異結合區(qū)域的蛋白。理論上，在單雜交檢測中，任何靶元件都可被用于篩選一種與之有特異結合區(qū)域的蛋白。

  那么酵母雙雜技術在現(xiàn)實驗中有哪些用途呢？

  1、迄今為止，應用酵母單雜交體系已經識別并驗證了許多與目的DNA序列結合的蛋白質，同時單雜交技術還被應用于識別金屬反應結合因子。正向與反向單雜交體系的結合，還可用于篩選阻礙DNA與蛋白質相互作用的突變的單個核苷酸。

  2、目前，在研究DNA—蛋白質相互作用中，酵母單雜交體系主要有以下3種用途：①確定已知DNA—蛋白質之間是否存在相互作用;②分離結合于目的順式調控元件或其他短DNA結合位點蛋白的新基因;③定位已經證實的具有相互作用的DNA結合蛋白的DNA結合結構域，以及準確定位與DNA結合的核苷酸序列。

  3、酵母單雜交是在酵母雙雜交的基礎上發(fā)展起來的技術，酵母單雜交主要用于研究蛋白質和DNA的相互作用，而酵母雙雜交主要是用于研究蛋白質間的相互作用。

  在實際的應用中，酵母雙雜也有一些無法避免的缺點，如：

  由于插入的靶元件與酵母內源轉錄激活因子可能發(fā)生相互作用，或插入的靶元件不需要轉錄激活因子就可以激活報告基因的轉錄，因此往往產生假陽性結果。如果酵母表達的AD融合蛋白對細胞有毒性，或融合蛋白在宿主細胞內不能穩(wěn)定地表達，或融合蛋白發(fā)生錯誤折疊，或者不能定位于酵母細胞核內，以及融合的Gal4AD封閉了蛋白質上與DNA相互作用的位點，則都可能干擾AD融合蛋白結合于靶元件的能力，從而產生假陰性結果。

  酵母單雜技術的簡單介紹我們就講到這里啦，關于酵母雙雜的見解、原理、流程、應用、缺點你都記住了嗎？沒記住沒關系，我們幫您做，如果有酵母單雜實驗外包或代做的需求，請選擇為真實實驗而生的普拉特澤~