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        蛋白功能已成為當(dāng)下研究的熱點(diǎn)之一，蛋白間相互作用在細(xì)胞的生命活動(dòng)中起著關(guān)鍵作用。相互作用的蛋白之間通過形成復(fù)雜的功能性復(fù)合體，參與細(xì)胞內(nèi)一系列的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而調(diào)控細(xì)胞及個(gè)體的生命活動(dòng)。研究蛋白間相互作用的常用方法有：酵母雙雜、雙分子熒光互補(bǔ)、免疫共沉淀和GST pull-down等。那么今天普拉特澤生物來詳細(xì)講的——GST pull-down實(shí)驗(yàn)。

        GST pull-down實(shí)驗(yàn)---GST：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase)是一個(gè)行之有效的驗(yàn)證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗(yàn)技術(shù),近年來越來越受到廣大學(xué)者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巰基轉(zhuǎn)移酶）融合蛋白親和固化在谷胱甘肽標(biāo)記的磁珠上,作為與目的蛋白親和的支撐物，充當(dāng)一種“誘餌蛋白”，目的蛋白溶液與之孵育，可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過SDS-PAGE電泳分析，從而證實(shí)兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白，“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行,操作方便?！ST：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase)

        GST pull-down技術(shù)主要在體外驗(yàn)證兩種蛋白之間是否存在直接的相互作用，其用途主要有兩個(gè)方面：一是證實(shí)兩種已知蛋白之間可能存在的相互作用；二是用于尋找能與已知的蛋白發(fā)生相互作用的未知蛋白。詳細(xì)作用有：

        1. 確定某一個(gè)蛋白質(zhì)與另一個(gè)蛋白質(zhì)的直接作用關(guān)系。

        2. 篩選某一個(gè)蛋白質(zhì)直接結(jié)合的蛋白質(zhì)族群。

        3. 驗(yàn)證酵母雙雜交系統(tǒng)結(jié)果的有效性。

        GST pulldown檢測的優(yōu)勢與不足

        優(yōu)勢：

        1. 區(qū)別于CoIP，GST pull down技術(shù)可以明確兩個(gè)蛋白質(zhì)之間是否直接作用。

        2. 可用于篩選與目的蛋白質(zhì)直接結(jié)合的蛋白質(zhì)族群。

        3. 可聯(lián)合酵母雙雜交系統(tǒng)綜合評(píng)估蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系，是一個(gè)有效的驗(yàn)證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗(yàn)技術(shù)。

        不足：體外表達(dá)的重組蛋白，無法完全模擬特定生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)活性及結(jié)合情況。

        通常我們研究蛋白互作的數(shù)據(jù)庫有很多，這里給大家推薦五個(gè)，可以自行選擇使用：

        1. MINT

        Licata L, Briganti L, Peluso D, et al. MINT, the molecular interaction database: 2012 update[J]. Nucleic acids research, 2011, 40(D1): D857-D861.

        網(wǎng)址：https://mint.bio.uniroma2.it

        2. STRING

        Szklarczyk D, Morris J H, Cook H, et al. The STRING database in 2017: quality-controlled proteinprotein association networks, made broadly accessible[J]. Nucleic acids research, 2017, 45(D1): D362-D368.

        網(wǎng)址：http://string-db.org/

        3. HPRO

        Prasad, T. S. K. et al. (2009) Human Protein Reference Database - 2009 Update. Nucleic Acids Research. 37, D767-72.

        網(wǎng)址：http://www.hprd.org/

        4. BioGRID

        Chatraryamontri A, Oughtred R, BoucherL, et al. The BioGRID interaction database: 2017 update[J]. Nucleic acids research, 2017, 45(D1): D369-D379.

        網(wǎng)址：http://thebiogrid.org/

        5. DIPOS

        Database of Interacting Proteins in Oryza SativaSapkota A, Liu X, Zhao X M, et al. DIPOS: database of interacting proteins in Oryza sativa[J]. Molecular BioSystems, 2011, 7(9): 2615-2621.

        網(wǎng)址：http://comp-sysbio.org/dipos/?id=5

        好啦，那關(guān)于GST pull down實(shí)驗(yàn)我們就簡單介紹到這里啦！下期跟大家分享GST pull down實(shí)驗(yàn)的操作步驟，如果您正在準(zhǔn)備操作這個(gè)實(shí)驗(yàn)或有GST pull down實(shí)驗(yàn)外包的需求，歡迎隨時(shí)留言與普拉特澤分子檢測平臺(tái)的技術(shù)進(jìn)行技術(shù)交流溝通！