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實驗新手的CHIP實驗簡介與原理【附視頻教程】

2022-04-08 17:55:34

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

   CHIP實驗的簡介與原理由普拉特澤生物旗下科研培訓品牌——春風學院為大家總結分享。CHIP是普拉特澤分子檢測平臺的常規(guī)實驗,有著極其成熟的技術經驗,實操熟練,周期短,我們專業(yè)承接CHIP等各類生物醫(yī)學實驗外包服務,值得信賴~

   CHIP即染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,是在全基因組水平研究生命體組織或細胞內蛋白質與DNA相互作用的一種技術方法。

   核酸和蛋白質是組成生命的主要生物大分子,兩者的相互作用是構成生命活動的生長、繁殖、運動、遺傳和代謝等生命活動的基礎。研究蛋白質和核酸間的相互作用是人們探索生命現象奧秘的關鍵,CHIP檢測實驗是應用于蛋白與核酸互作關系的重要參考。

   CHIP利用抗原抗體反應的特異性,可以真實地反映蛋白質與基因組DNA結合的狀況。特別是由于該技術不斷的發(fā)展和完善,其應用范圍已經從研究目的蛋白與已知靶序列間的相互作用,發(fā)展到研究目的蛋白與整個基因組的未知序列的相互作用;從研究一個目的蛋白與DNA的相互作用,發(fā)展到研究兩個蛋白與DNA共同結合的相互作用;從研究啟動子區(qū)域的組蛋白的修飾,發(fā)展到研究結合在DNA序列上的蛋白復合物。


   CHIP染色質免疫沉淀技術的原理是:在生理狀態(tài)下把細胞內的DNA與蛋白質交聯在一起,通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后,利用抗原抗體的特異性識別反應,將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來。染色質免疫沉淀技術一般包括細胞固定,染色質斷裂,染色質免疫沉淀,交聯反應的逆轉,DNA的純化,以及DNA的鑒定。因為ChIP實驗涉及的步驟多,結果的重復性較差,所以對ChIP實驗過程的每一步都應設計相應的對照,而且對結果的分析也需要有一定的經驗。

   CHIP的類型:最常見的單基因分析和全基因組分析方法分別是qPCR CHIP-seq。

   CHIP-PCR的優(yōu)點:CHIP-PCR可用來分析基因組中一部分已知靶標位點上的組蛋白修飾和/或蛋白結合情況。在CHIP-PCR 中,使用廣泛提供的PCR qPCR 試劑和技術可檢測和定量免疫富集的DNA片段。使用CHIP-qPCR 可以對多種樣品中的特定基因組區(qū)域進行快速和定量比較。這比全基因組測序方法更便宜,更省時。

   ChIP-芯片的優(yōu)點ChIP-芯片技術是指使用一個DNA 微陣列芯片來分析經CHIP免疫富集的DNA片段。使用基因組覆瓦式微陣列技術可以對結合分離 DNA 的蛋白進行全基因組分析,并產生一個高分辨率的有關蛋白結合和蛋白修飾的基因組圖。CHIP-芯片在基礎研究和疾病研究中有多種用途。例如,可用來檢測轉錄因子、增強子和阻遏蛋白的結合位點,并比較對照和病理性樣品中的這些結合蛋白種類。但NGS的成本大幅下降,并且使用CHIP-seq 也能獲得類似結果,因此更多的人會選擇進行CHIP-seq,而不是CHIP-芯片。

    ChIP-seq的優(yōu)點:ChIP-芯片類似,CHIP-seq 提供有關全基因組蛋白結合的信息。但不像CHIP-芯片,CHIP-seq 使用 NGS 技術來檢測 DNA 片段,并根據整個基因組將其繪制成圖。有了更現代的DNA 擴增技術,可以在數日之內對少量輸入DNA 進行穩(wěn)健分析。當起始材料較稀有時,在庫制備方法方面取得的這些技術性進展會使ChIP-seq 實驗成為可能。此外,有了使用短序列(稱為條形碼)獨特地標記DNA樣品的新技術,現在可以將個別片段匯集到一個測序泳道中,以便進行多重分析。這大大提升了DNA 測序實驗的效率,并降低了成本,從而進一步支持CHIP seq 應用。

   好啦,關于ChIP實驗的簡介我們就講完啦,還有不懂的或者需要補充的同學歡迎隨時留言補充,為文章添磚加瓦讓其更全面。想要視頻學習的同學請戳:CHIP實驗 理論+實操