雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灣Ｒ妴栴}與解答【附操作教程】
2022-03-25 15:19:16
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?/a>常見問題與解答由普拉特澤生物分子檢測平臺給大家總結(jié)分享，文尾附上視頻教程供大家學(xué)習(xí)。普拉特澤生物更承接包括線下雙熒光素酶報告基因檢測等各類生物實驗外包服務(wù)，旗下科研培訓(xùn)品牌《春風(fēng)學(xué)院》為廣大科研人員提供線上下6大國自然專題精講、15項常用實驗技能講解與實操培訓(xùn)課程，徹底提高您的實驗操作技能。
好了話不多說我們來看看天才同學(xué)們的提問吧：
Question1：什么是雙熒光素酶報告基因測試系統(tǒng)（DLR）?
A：DLR測試系統(tǒng)靈敏，方便，在一個系統(tǒng)中用于測量兩個單獨的熒光素酶報告基因， 螢火蟲熒光素酶及海洋海腎熒光素酶 (Renilla reniformis)，DLR測試系統(tǒng)可用于細胞裂解物及無細胞的翻譯系統(tǒng)。
Question2：用雙報告基因有何優(yōu)點?
A：一般地說，實驗報告基因用于測試實驗條件下基因的表達， 而另一個報告基因作為內(nèi)對照，以提供實驗報告基因測試的歸一化。將實驗報告基因的活力與內(nèi)對照報告基因的活力作歸一化可消除實驗中不同測試間所固有的變化。 這些變化減弱實驗準(zhǔn)確度，其中包括培養(yǎng)細胞的數(shù)目及活力的差異，細胞轉(zhuǎn)染及裂解的效率。海腎熒光素酶可用作對照報告基因及實驗報告基因。在雙熒光素酶報告基因測試中，將螢火蟲熒光素酶作為實驗報告基因，海腎熒光素酶作為對照報告基因。
Question3：海腎熒光素酶與螢火蟲熒光素酶相比的相對活性如何?
A：在ATP、鎂、氧存在時，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸(Renilla reniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。
Question4：將兩個報告基因載體作共轉(zhuǎn)染應(yīng)用什么條件?
A：（1）當(dāng)用雙熒光素酶報告基因測試系統(tǒng)來測量等重量的螢火蟲熒光素酶及海腎熒光素酶時，可觀察到它們釋放的光幾乎相等。黃火蟲熒光素酶的分子量為61 kD，而海腎熒光素酶的分子量為36 kD，當(dāng)測試等重量的兩個酶時，所測的海腎熒光素酶分子實際多69%。如以每摩爾為基礎(chǔ)，據(jù)實驗確定，用雙熒光素酶報告基因試劑測試的瑩火蟲熒光素酶的熒光強度比海腎熒光素酶強大約53%。
（2）共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒所含啟動子間的反式效應(yīng)有可能會影響到報告基因的表達。
（3）為體實驗報告基因及對照報告基因的基因表達相對獨立。每次實驗時轉(zhuǎn)染混和液中載體DNA的量及共轉(zhuǎn)染報告基因載體的比例需作優(yōu)化?？刹捎脤嶒炤d體與共轉(zhuǎn)染報告基因載體的組成比在10:1到50:1或更大的范圍，這有利于抑制啟動子間的交互作用。有時為有利于實驗，共轉(zhuǎn)染混和液中的實驗載體應(yīng)選擇為少量部分。
Question5：需用熒光測試儀對雙熒光素酶報告基因測試系統(tǒng)的熒光素酶作測定嗎?
A：作DLR測試時應(yīng)使用熒光測試儀，液閃儀的靈敏度相比太低，不易獲得可重復(fù)的結(jié)果。
Question6：被動裂解液能裂解培養(yǎng)的植物細胞嗎？它能裂解哺乳動物組織所得的初級細胞嗎？
A：被動裂解液不能裂解植物細胞。它能裂解一些類型的哺乳初級細胞。一種細胞能否被它裂解需作測試。
好了，好啦，關(guān)于雙熒光素酶實驗的常見問題與答疑我們就講完啦，還有不懂的同學(xué)歡迎隨時留言哦，需要視頻教程的同學(xué)請點擊：《雙熒光素酶原理+實操》
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