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        今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習一個新的實驗技術(shù)——酵母雙雜交系統(tǒng)。酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid system）的建立是基于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認識。普拉特澤生物——分子檢測平臺長期承接酵母雙雜實驗代做，今天就來跟大家一起簡單學(xué)習一下什么是酵母雙雜系統(tǒng)。

        酵母雙雜交系統(tǒng)是將待研究的兩種蛋白質(zhì)分別克?。ㄈ诤希┑浇湍副磉_質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子（如GAL4等）的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）上，構(gòu)建成融合表達載體，從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。

        雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認識。細胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄激活因子的參與。80年代的工作表明，轉(zhuǎn)錄激活因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的（modular），即這些因子往往由兩個或兩個以上相互獨立的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA binding domain，簡稱為BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（activation domain，簡稱為AD），它們是轉(zhuǎn)錄激活因子發(fā)揮功能所必需的。單獨的BD雖然能和啟動子結(jié)合，但是不能激活轉(zhuǎn)錄。而不同轉(zhuǎn)錄激活因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的激活轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性激活結(jié)構(gòu)域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結(jié)合到Gal4結(jié)合位點并激活轉(zhuǎn)錄。

        Fields等人的工作標志著雙雜交系統(tǒng)的正式建立。他們以與調(diào)控SUC2基因有關(guān)的兩個蛋白質(zhì)Snf1和Snf2為模型，將前者與Gal4的BD結(jié)構(gòu)域融合，另外一個與Gal4的AD結(jié)構(gòu)域的酸性區(qū)域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分別稱之為“誘餌”（bait）和“獵物”或靶蛋白（prey or target protein）。發(fā)展起來的各種雙雜交系統(tǒng)大多是以Fields等人建立的系統(tǒng)為基礎(chǔ)的。

        在雙雜交鑒定過程中要經(jīng)過兩次轉(zhuǎn)化，這個工作量是相當大的，特別是尋找新的作用蛋白質(zhì)的時候尤其如此。Bendixen等人通過酵母接合型的引用，避免了兩次轉(zhuǎn)化操作，同時又提高了雙雜交的效率。在酵母的有性生殖過程中涉及到兩種配合類型：a接合型和α接合型，這兩種單倍體之間接合（mating）能形成二倍體，但a接合型細胞之間或α接合型細胞之間不能接合形成二倍體。

        酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內(nèi)測定蛋白質(zhì)的結(jié)合作用，具有高度敏感性。

        主要是因為：

        ①采用高拷貝和強啟動子的表達載體使雜合蛋白過量表達。

        ②信號測定是在自然平衡濃度條件下進行，而如免疫共沉淀等物理方法為達到此條件需進行多次洗滌，降低了信號強度。

        ③雜交蛋白間穩(wěn)定性可被激活結(jié)構(gòu)域和結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物而增強，后者又與啟動子DNA結(jié)合， 此三元復(fù)合體使其中各組分的結(jié)合趨于穩(wěn)定。

        ④通過mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號放大。同時，酵母表型，X-Gal及HIS3蛋白表達等檢測方法均很敏感。

        好啦，酵母雙雜系統(tǒng)的介紹我們就簡單講到這里啦，有什么不懂的可以給客服留言，我們會及時給到您回復(fù)的，如果您有酵母雙雜試驗外包需求的話也歡迎直接留言，下期給大家介紹實驗的操作步驟，我們下期見！