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        細(xì)胞實驗之血管生成操作步驟由普拉特澤生物給大家總結(jié)分享。血管生成是從已有的毛細(xì)血管或毛細(xì)血管后靜脈發(fā)展而形成新的血管，其對于器官生長、胚胎發(fā)育和傷口愈合在內(nèi)的多種過程十分重要。普拉特澤生物——細(xì)胞實驗平臺操作血管生成實驗上百次，有豐富的多種細(xì)胞實驗經(jīng)驗，下面我們就來看看常規(guī)的血管生成實驗步驟：

        一、準(zhǔn)備基質(zhì)膠

        1.實驗前一天將Matrigel置于冰盒中，放入4°C冰箱，使膠能過夜緩慢融化。(注意:同樣要準(zhǔn)備一些4。C預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigel)

        2.開始實驗前，將Matrigel始終保持放在冰盒中。

        3.打開滅菊包裝，取出ibidi血管生成載玻片。

        4.每孔中加入10ul Matrigel。注意槍頭要垂直干內(nèi)孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流經(jīng)上孔而留下殘留膠。

        由于Matrigel流動性不強(qiáng)，并且有可能移液槍不準(zhǔn)確，有可能打入10 ul的膠，卻不能填滿血管生成載玻片的下孔--這樣，必然會影響到實驗的成像結(jié)果。

        如何判斷是否加入了合適體積的Matrigel：我們只需用一張格子紙就能知道自己的移液槍調(diào)整到多少能正好把下孔填滿，垂直透過每個孔看下面的格子紙，如果格子被縮小了，那么就說明膠沒加滿，格子被放大了，那么膠就加多了，格子沒發(fā)生什么變形，這才是剛剛加滿下孔的狀態(tài)。

        二、準(zhǔn)備凝膠

        1.蓋上ibidi血管生成載玻片的蓋子。

        2.準(zhǔn)備一個10 cm的培養(yǎng)皿，放入浸過水的紙巾，制成一個濕盒。

        3.將ibidi血管生成載玻片放入培養(yǎng)皿中，蓋上培養(yǎng)皿蓋。

        4.將整個培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中，靜置30分鐘左右，等待膠凝結(jié)。

        5.等待同時準(zhǔn)備細(xì)胞懸液。

        三、鋪細(xì)胞

        加入細(xì)胞的量直接影響實驗結(jié)果，所以在正式實驗開始之前，要對不同類型的細(xì)胞和使用數(shù)量進(jìn)行預(yù)實驗。獲得最佳比例的細(xì)胞密度。

        1.準(zhǔn)備密度為2*105cells/ml的細(xì)胞懸液，充分混勻。

        2.將膠已經(jīng)凝固的ibidi 血管生成載玻片從濕盒中取出。

        3.每孔加入50 ul的細(xì)胞懸液，注意保持槍頭垂直在上孔的上方，不要接觸下孔的凝膠?？梢允褂门艠?。

        4.同樣用格子紙查看是不是加了足夠量的液體，如果沒有，加入無細(xì)胞的培養(yǎng)基，使上孔液體正好加滿。

        5.蓋上蓋，靜置，一段時間后，所有細(xì)胞都會沉下去落在 Matrigel 的表面。

        四、采集圖像并統(tǒng)結(jié)果

        可以按照細(xì)胞的生長速度定時采集圖像，并且對其成管長度，覆蓋面積，成環(huán)數(shù)，結(jié)點(diǎn)數(shù)進(jìn)行測量和記錄，并且對其進(jìn)行統(tǒng)計分析

        OK！那血管生成實驗的操作步驟咱們就講解到這里啦！如果您也準(zhǔn)備做血管生成實驗或有血管生成實驗代做的需求，可以直接留言，下期教大家如何分析血管生成實驗的數(shù)據(jù)結(jié)果，咱們下期見！