Southern Blot印跡雜交實驗介紹——新人必看
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
大家好,今天給大家介紹一個新的實驗,Southern Blot印跡雜交實驗。 Southern Blot是研究DNA圖譜的基本技術(shù),在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價值。普拉特澤生物分子檢測平臺在southern Blot實驗上總結(jié)了非常豐富的經(jīng)驗,為廣大科研人員提供包括印跡雜交等分子檢測實驗的外包與技術(shù)協(xié)助服務(wù),掃平您的科研路。
Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下,可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上,經(jīng)干烤或者紫外線照射固定,再與相對應(yīng)結(jié)構(gòu)的標記探針進行雜交,用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色,從而檢測特定DNA分子的含量。
Southern印跡雜交技術(shù)包括兩個主要過程:一是將待測定核酸分子通過一定的方法轉(zhuǎn)移并結(jié)合到一定的固相支持物(硝酸纖維素膜或尼龍膜)上,即印跡(blotting);二是固定于膜上的核酸與同位素標記的探針在 一定的溫度和離子強度下退火,即分子雜交過程。
印跡方法如電轉(zhuǎn)法、真空轉(zhuǎn)移法;濾膜發(fā)展了尼龍膜、化學(xué)活化膜(如APT、ABM纖維素膜)等。
Southern Blot實驗主要應(yīng)用在以下方面:
1、遺傳病診斷
2、DNA圖譜分析
3、檢測樣品中的DNA及其含量
4、PCR產(chǎn)物分析
Southern Blot實驗大概步驟:
1、待測核酸樣品的制備
2、 瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品
3、電泳凝膠預(yù)處理
4、轉(zhuǎn)膜
5、探針標記
6、預(yù)雜交(prehybridizafion)
7、Southern雜交
8、洗膜
9、放射性自顯影檢測
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