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Southern Blot印跡雜交實驗介紹——新人必看

2022-04-28 10:21:26

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

      大家好,今天給大家介紹一個新的實驗,Southern Blot印跡雜交實驗。 Southern Blot是研究DNA圖譜的基本技術(shù),在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價值。普拉特澤生物分子檢測平臺在southern Blot實驗上總結(jié)了非常豐富的經(jīng)驗,為廣大科研人員提供包括印跡雜交等分子檢測實驗的外包與技術(shù)協(xié)助服務(wù),掃平您的科研路。

      Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下,可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上,經(jīng)干烤或者紫外線照射固定,再與相對應(yīng)結(jié)構(gòu)的標記探針進行雜交,用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色,從而檢測特定DNA分子的含量。



      Southern印跡雜交技術(shù)包括兩個主要過程:一是將待測定核酸分子通過一定的方法轉(zhuǎn)移并結(jié)合到一定的固相支持物(硝酸纖維素膜或尼龍膜)上,即印跡(blotting);二是固定于膜上的核酸與同位素標記的探針在 一定的溫度和離子強度下退火,即分子雜交過程。

      印跡方法如電轉(zhuǎn)法、真空轉(zhuǎn)移法;濾膜發(fā)展了尼龍膜、化學(xué)活化膜(如APT、ABM纖維素膜)等。

      Southern Blot實驗主要應(yīng)用在以下方面:

      1、遺傳病診斷

      2、DNA圖譜分析

      3、檢測樣品中的DNA及其含量

      4PCR產(chǎn)物分析

      Southern Blot實驗大概步驟:

      1、待測核酸樣品的制備

      2、 瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品

      3、電泳凝膠預(yù)處理

      4、轉(zhuǎn)膜

      5、探針標記

      6、預(yù)雜交(prehybridizafion)

      7、Southern雜交

      8、洗膜

      9、放射性自顯影檢測

      好啦,那關(guān)于Southern Blot實驗我們就介紹到這里啦,還有關(guān)于Southern Blot印跡實驗更多問題咨詢的歡迎留言哦,技術(shù)小姐姐會第一時間給到最專業(yè)的回復(fù)噠!還有需要Southern Blot實驗代做服務(wù)請認準咱們普拉特澤哦!