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實時熒光定量 PCR(qPCR)的介紹

2023-03-20 13:08:33

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

           普拉特澤生物為致力為廣大生命科學(xué)研究人員提供實時熒光定量PCR外包服務(wù),可根據(jù)實方案的要求選擇不同的檢測方法,本文就跟大家一起來看看。

什么是實時熒光定量PCR?



   實時熒光定量 PCR(qPCR)是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測和定量目標(biāo) DNA 的數(shù)量。與常規(guī) PCR 不同,qPCR 可以在 PCR 反應(yīng)進行的同

時測量產(chǎn)生的熒光信號,從而可以實時監(jiān)測 PCR 反應(yīng)的過程。

   
   
   在 qPCR 中,熒光信號與目標(biāo)DNA的數(shù)量成正比,因此可以使用熒光信號來計算目標(biāo)DNA的濃度。通常使用兩種方法來檢測熒光信號:SYBR

Green 和探針法。SYBR Green可以結(jié)合任何DNA,因此適用于檢測多個目標(biāo),而探針法則需要針對特定目標(biāo)設(shè)計探針。

qPCR 通常由以下步驟組成:


   模板 DNA 的制備:通常將 DNA 提取并純化,以獲得高質(zhì)量的模板 DNA。


   引物和探針的設(shè)計:引物和探針是用于擴增和檢測目標(biāo) DNA片段的DNA片段。引物需要設(shè)計成能夠在目標(biāo) DNA 片段的兩端精確結(jié)合,并且要有足夠的特異性,以避免與非目標(biāo) DNA 片段發(fā)生雜交。


   PCR 反應(yīng)的設(shè)置:PCR反應(yīng)需要引物、熒光染料和模板 DNA,并且要在恰當(dāng)?shù)臏囟群蜁r間下進行。


   熒光信號的檢測:在 PCR 反應(yīng)進行的同時,熒光信號也會產(chǎn)生,可以使用qPCR儀器實時檢測。


   數(shù)據(jù)分析:熒光信號的大小可以用于計算目標(biāo) DNA 的濃度,通常使用閾值法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法來計算。同時qPCR 技術(shù)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究和臨床診斷等領(lǐng)域,如基因表達分析、病原體檢測、單核苷酸多態(tài)性分析等。


qPCR應(yīng)用范圍:
   比如臨床疾病診斷:
各型肝炎、艾滋病、禽流感、結(jié)核、性病等傳染病診斷和療效評價;地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測;腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測實現(xiàn)腫瘤病診斷;遺傳基因檢測實現(xiàn)遺傳病診斷。


    動物疾病檢測:


    禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。


    食品安全:

   
    食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。


    科學(xué)研究:


    醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。


    應(yīng)用行業(yè):


    各級各類醫(yī)療機構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。


    由于qPCR是實時定量檢測致病病原體基因核酸,因此它比化學(xué)發(fā)光、時間分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨到優(yōu)勢。


 好啦,實時熒光定量 PCR我們就介紹到這里啦,同學(xué)們有沒有一個簡單的了解呢?不懂的可以給客服留言方便為您詳細解答。下一篇再詳細為大家
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