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    大家好！今天普拉特澤生物繼續(xù)帶大家一起學(xué)習(xí)新實(shí)驗(yàn)——RNA pull-downll實(shí)驗(yàn)，RNA pull-down實(shí)驗(yàn)是一種用于尋找RNA靶標(biāo)的實(shí)驗(yàn)方法，它

    結(jié)合了RNA雜交技術(shù)和親和層析技術(shù)。普拉特澤生物病理實(shí)驗(yàn)平臺長期為大家提供RNA pull-down實(shí)驗(yàn)代做外包服務(wù)，本文跟大家分享RNApull-down實(shí)驗(yàn)原理介紹+實(shí)驗(yàn)步驟:

 

    該實(shí)驗(yàn)的主要原理是利用一種與目標(biāo)RNA互補(bǔ)的DNA探針固定在瓊脂糖珠上，通過混合樣品中的RNA和蛋白質(zhì)來鑒定RNA的結(jié)合伴侶。

    具體步驟如下：

    1. 在實(shí)驗(yàn)前制備好具有生物學(xué)意義的RNA分子，并根據(jù)需要對其進(jìn)行修飾或標(biāo)記。

    2. 將RNA與DNA探針情況下進(jìn)行熱變性，然后快速冷卻，以便DNA可以與RNA形成完整的雙鏈結(jié)構(gòu)，這個(gè)過程被稱為RNA逆轉(zhuǎn)錄合成。

    3. 將RNA-DNA卡特蘭復(fù)合物添加到瓊脂糖珠中，并通過旋轉(zhuǎn)等手段使其定時(shí)搖動以保證孵育的均勻性。

    4. 導(dǎo)入含RNA和蛋白質(zhì)的細(xì)胞裂解液，將孵育液孵育24-72小時(shí)，使這些蛋白質(zhì)與靶RNA結(jié)合。

    5. 通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)，還原RNA-DNA復(fù)合物，從而使靶RNA單鏈從DNA探頭上解離，這部分是拉下（pull-down）步驟。

    6. 將洗滌過程中留下的蛋白質(zhì)分離、純化，并通過蛋白質(zhì)分析技術(shù)進(jìn)行分析。

    總之，RNA pull-down實(shí)驗(yàn)是一種簡單有效的技術(shù)，可用于確定RNA結(jié)合伴侶，發(fā)現(xiàn)潛在的RNA功能以及了解它們與蛋白質(zhì)相互作用的方式。

                                      (附RNA pulldown實(shí)驗(yàn)案例圖）

    好啦，RNA pull-down實(shí)驗(yàn)原理和步驟我們就簡單介紹到這里啦，同學(xué)們有沒有一個(gè)簡單的了解呢？不懂得可以給客服留言技術(shù)給您詳細(xì)解

答。下一篇再詳細(xì)為大家介紹檢測RNA pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，普拉特澤生物誓讓大家透徹學(xué)習(xí)RNA pull-down實(shí)驗(yàn)。當(dāng)然若果您有RNA pull-down實(shí)驗(yàn)或其他醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)外包的需求，歡迎隨時(shí)咨詢哦。