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  這次普拉特澤生物繼續(xù)為廣大生命科學(xué)研究人員提供免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，可根據(jù)實(shí)方案的要求選擇不同的檢測(cè)方法，讓我們一起學(xué)習(xí)免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)操作流程和步驟吧：

下面是免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟和操作流程：

    1. 樣品處理：將細(xì)胞或組織樣品進(jìn)行裂解，得到待檢測(cè)的蛋白質(zhì)混合物，并加入蛋白酶抑制劑以避免目標(biāo)蛋白被降解。樣品來源可以是生物內(nèi)提取、組織培養(yǎng)等。

    2. 共價(jià)固定抗體：將專一的抗體連接到親和樹脂上（如蛋白A的親和樹脂或蛋白G的親和樹脂）或?qū)⒌鞍着c其特異性抗體結(jié)合，新形成的復(fù)合物與封閉劑緩慢搖擺在二氧化硅珠上，將COOH基與Si-OH鈍化，使碘酸鈣交聯(lián)后節(jié)制反應(yīng)。

    3. 免疫共沉淀：將有抗體樹脂的樣品與吸附抗體樹脂形成免疫復(fù)合物，INCUBATE用于免疫沉淀。硫酸銨沉淀可用于純化蛋白。

    4. 洗滌：采用洗滌緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行洗滌，以去除非特異性的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，同時(shí)盡量避免對(duì)復(fù)合物的影響。洗滌緩沖液選擇對(duì)樣品不會(huì)引起較大影響的緩沖液和洗滌劑。

    5. 后續(xù)實(shí)驗(yàn)：將沉淀的復(fù)合物通過SDS-PAGE分離出來，并進(jìn)行Western blotting檢測(cè)目標(biāo)蛋白及其配偶蛋白。另一方面，也可以直接使用質(zhì)譜分析檢測(cè)。

    總之，免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)是一種通過抗原-抗體相互作用來捕獲特定蛋白質(zhì)交互作用信息的高通量低污染方法。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，在樣品處理、試劑準(zhǔn)備等關(guān)鍵步驟上需注意實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以確保得到可靠的結(jié)果。

  今天關(guān)于免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)操作流程和步驟就分享到這兒啦~如果您在實(shí)驗(yàn)過程中遇到技術(shù)問題，或者需要實(shí)驗(yàn)外包和代做，可與我們技術(shù)老師聯(lián)系哦：18570028002（微信同號(hào)）