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酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)采用的系統(tǒng)有哪些?

2023-04-07 11:51:11

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)

 

 
        上次帶大家學(xué)習(xí)了關(guān)于酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)的步驟和原理,這期普拉特澤生物繼續(xù)為大家學(xué)習(xí)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)采用的系統(tǒng)有哪些,普拉特澤生物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)長期為大家提供酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)代做外包服務(wù)本文就跟大家一起學(xué)習(xí)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)采用的系統(tǒng)有哪些:



酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)是一種常用的蛋白質(zhì)互作研究方法,通過檢測兩個(gè)不同的蛋白質(zhì)是否能夠相互結(jié)合,來推斷它們之間可能存在的相互作用關(guān)系。





                                                                                           (酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)圖)                                                                                            



下面列出幾種常用的酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):



            1. Gal4系統(tǒng):在該系統(tǒng)中,承載DNA結(jié)合域Gal4(DBD)的表達(dá)載體和承載激活域Gal4(AD)的表達(dá)載體連接后,形成一個(gè)功能完整轉(zhuǎn)

            錄因子,從而激活熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)。


            2. LexA系統(tǒng):在該系統(tǒng)中,LexA DNA結(jié)合域(DBD)與LexA激活域(AD)分別構(gòu)建到表達(dá)載體上,當(dāng)兩個(gè)載體共轉(zhuǎn)染至酵母細(xì)胞時(shí),如

            果采用reporter construction體系,則可以依據(jù)β-galactosidase、URA3或LEU2等物質(zhì)檢測雙雜交結(jié)果。


            3. T7 RNA聚合酶系統(tǒng):該系統(tǒng)中,T7 RNA聚合酶被拆分成兩個(gè)部分,其中一個(gè)與測試蛋白(預(yù)編碼)結(jié)合,另一個(gè)與受測蛋白(靶標(biāo))

            結(jié)合,從而激活T7 RNA聚合酶的活性。


            4. 金屬感應(yīng)系統(tǒng):在該系統(tǒng)中,分別將金屬Io10 DNA結(jié)合域和MYC激活域構(gòu)建到表達(dá)載體上,在轉(zhuǎn)染至酵母細(xì)胞以后,通過添加金屬子
       
           (如Cu2+、Ni2+等),使金屬離子與特定氨基酸殘基配對(duì),從而促進(jìn)兩種蛋白質(zhì)間相互結(jié)合。




以上這些系統(tǒng)是常用的酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),它們都有各自的優(yōu)缺點(diǎn),選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)系統(tǒng),有助于提高實(shí)驗(yàn)效率和可靠性。



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