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彗星實驗/單細胞凝膠電泳實驗注意事項【附操作視頻】

2022-07-14 16:45:21

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

  大家好呀,今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是彗星實驗(單細胞凝膠電泳實驗)操作時的注意事項,文末附上彗星實驗理論操作視頻教程供大家學習。彗星實驗是種在單細胞水平檢測DNA 損傷程度的方法,作為普拉特澤生物細胞實驗平臺的常規(guī)實驗,我們承接的彗星實驗外包積累了超多種類細胞樣本的案例,歡迎大家留言咨詢領取案例。

  那么話不多說,現在我們就來看看彗星實驗的操作中有哪些注意事項吧!

      1、細胞一定要消化成單個的,如果待測的細胞是懸浮生長的,或者形狀是圓形的,可以直接用細胞刮收細胞做,如果細胞是非圓形的,例如成纖維細胞等,一定要用胰酶消化,使之成圓形,然后才可做實驗。很多做彗星實驗總是出不來結果的,可以考慮下是否是這方面的原因。

  2、細胞裂解:裂解條件也是一個關鍵變量,可能會干擾特定類型的DNA修飾(某些DNA烷基化和堿基內收)導致的鏈斷裂。因此,建議在實驗中對所有玻片的裂解條件盡可能保持恒定。準備好后,應在約2-8攝氏度的弱光條件下(如黃光(或防光),將載玻片浸入冷凍溶解液中至少1小時(或過夜),以避免暴露在可能含有紫外線成分的白光下。在此潛伏期之后,在堿液展開步驟之前,應沖洗載玻片以除去殘留的洗滌劑和鹽。這可以用純凈水、中和緩沖液或磷酸鹽緩沖液來完成。

  3、玻片準備:單細胞懸液制備后,應盡快(最好在1小時內)制備載玻片,但動物死亡與載玻片制備之間的溫度和時間應嚴格控制,并在實驗室條件下進行驗證。

  4、電泳時,電流與電壓強度在每次實驗時要恒定,這樣出來的慧尾才有分析價值,將載玻片隨機放置在含有足夠電泳溶液的潛電泳裝置的平臺上,使載玻片表面完全覆蓋(每次覆蓋的深度也應一致)。

  5、掉膠的問題:蓋玻片最好兩面都涂上剝離硅烷(挺便宜的一大瓶,但是有毒),這樣會好很多。

  6、使用組織進行彗星試驗時,需注意細胞制備需全程在冰上進行,且保證在1 h內完成鋪片。

  7、電泳膠使用時需提前水浴融化,禁用微波,清洗玻片時注意不要直接將液體傾倒至膠面,防止脫膠。

  8、測量方法:彗星應該使用自動化或半自動化的圖像分析系統(tǒng)進行定量評分。用合適的熒光染色劑對載玻片進行染色,并在配備有超熒光和適當檢測器的顯微鏡或數碼相機上進行適當放大(200x)的測量。

  好啦,那彗星實驗(單細胞凝膠電泳)操作的注意事項咱們就講完啦,視頻教程點擊《彗星實驗 理論+實操》,如果您也想學習彗星實驗或者對彗星實驗感興趣有不同的意見和想法,歡迎留言交流哦,下篇跟大家一起盤一盤,彗星實驗中的常見問題,,我們下期見~