彗星實(shí)驗(yàn)操作常見問題答疑【附視頻教程】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
彗星實(shí)驗(yàn)操作常見問題答疑由普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)給大家答疑解惑,文末附上彗星實(shí)驗(yàn)的理論與操作視頻供大家參考學(xué)習(xí)。彗星實(shí)驗(yàn)可以很直觀地反映出檢測(cè)樣本的DNA損傷情況、并有效地檢測(cè)和定量分析細(xì)胞中DNA單,雙鏈缺口損傷的程度,普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)專業(yè)承接彗星實(shí)驗(yàn)外包與技術(shù)支持工作,專業(yè)認(rèn)真,值得信賴。(彗星實(shí)驗(yàn)介紹、操作步驟、注意事項(xiàng)點(diǎn)擊跳轉(zhuǎn))
問題一:彗星玻片可以重復(fù)使用嗎?
答:不能。彗星玻片表面經(jīng)過了特殊處理,一旦整個(gè)玻片經(jīng)歷了變性,電泳和洗滌的操作步驟,就不能再重復(fù)使用了。
問題二:可以用常規(guī)載玻片代替試劑盒中的彗星玻片嗎?
答:不能,彗星玻片經(jīng)過化學(xué)預(yù)處理,以增加附著力。如果采用常規(guī)載玻片的話,您的細(xì)胞/瓊脂糖液滴將無法停留在載玻片上。
問題三:彗星玻片有多厚?
答:1.0mm(底層厚度,不包含藍(lán)色層)
問題四:樣本染料染色后,玻片可以保存多久?
答:玻片可在4℃的黑暗環(huán)境中保存3個(gè)月,熒光也不褪色。 干燥且低溫儲(chǔ)存的載玻片可以保存一年。
問題五:說明書中配置電泳液的過程中沒有提到是否需要滅菌?
答:不需要滅菌。如果配置的過程中發(fā)現(xiàn)有不溶物,可以進(jìn)行過濾處理。
問題六:什么是好的陽性對(duì)照?
答:用20uM依托泊苷培養(yǎng)細(xì)胞4小時(shí),作為彗星實(shí)驗(yàn)的陽性對(duì)照。
問題七:是否有化合物誘導(dǎo)DNA損傷的彗星分析數(shù)據(jù)供參考呢?
答:與ELISA不同,彗星實(shí)驗(yàn)不提供對(duì)照,因?yàn)槿魏五缧菍?shí)驗(yàn)結(jié)果都將根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件的不同而變化。例如,如果電泳條件不同,則包含相同數(shù)量 DNA 損傷的細(xì)胞的尾巴大小可能會(huì)不同。所以,與我們的結(jié)果或其他研究人員的結(jié)果進(jìn)行比較將毫無意義,因?yàn)閮烧咧g的條件永遠(yuǎn)不會(huì)相同。如果您有興趣測(cè)試化合物對(duì)DNA損傷的影響,建議保持所有實(shí)驗(yàn)條件一致,并使用相同的運(yùn)行時(shí)間和軟件進(jìn)行分析。
問題八:如何防止瓊脂糖凝膠從載玻片上脫落?
答:彗星玻片經(jīng)過化學(xué)處理,表面帶有粘性,可吸附瓊脂糖。瓊脂糖從玻片上脫落,主要是因?yàn)榄傊?/span>-細(xì)胞混合液添加到玻片孔上時(shí),未完全覆蓋。必須保證瓊脂糖凝膠完全覆蓋在孔上,另外玻片始終保持水平狀態(tài)也很重要。
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