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        HE染色常見問題與處理方法由普拉特澤生物總結分享。一張優(yōu)質的HE染色切片，應該具備切片完整、無皺褶、細胞核著色清晰呈藍色、細胞質呈鮮紅色、核仁核膜核內染色質顆粒清晰等特點，但多數切片染色新手即使是照書操作，仍然是破綻不斷，慘不忍睹。普拉特澤生物病理實驗平臺在承接大量的HE染色代做實驗后，積累豐富的操作經驗，染過多種動植物、菌類組織樣本，總結了HE染色時常見的各種常見問題與解決方法。一起來看看吧！

        1、切片在脫蠟后出現大片白色的斑點

        原因：（1）烤(烘)片溫度太低，玻片在脫蠟前沒有充分烤(烘)干；（2）切片在二甲苯停留時間不足；（3）二甲苯使用過久，造成脫蠟不完全。

        處理方法：如果玻片是由于沒有烤(烘)干,先用無水乙醇處理去除玻片上的水分，然后重新用二甲苯進行脫蠟處理。如果烤(烘)干不足的現象比較嚴重，可能導致切片脫落，則無法補救。如果白色斑點是由于切片在二甲苯停留時間不足造成，或使用的二甲苯過久，切片則需退回到二甲苯操作步驟，使其停留時間相對長些，或更換二甲苯，進行重新染色。

        2、細胞核染色暗淡，即蘇木精染色太淡

        原因：（1）切片在蘇木精染色液停留時間太短；（2）蘇木精染色液過度氧化，失去染色能力，不能再繼續(xù)使用； （3）分化步驟處理時間過長。如果是骨組織細胞核暗淡，則多數是由于脫鈣過度造成。

        處理方法：切片重新染色。如果組織在固定液固定時間過長，細胞核染色能力將減弱，須增加其在蘇木精染色液的時間，或用一些方法增加組織的嗜堿性，以改善細胞核的著色。

        3、細胞核呈紅、棕色改變

        原因：蘇木精染色液過度氧化和切片在蘇木精染液染色后返藍不足。

        處理方法：首先，每次染色之前檢查蘇木精染色液的染色能力，發(fā)現氧化過度應及時更換。其次，可用流水、溫水或弱堿性溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氫鈉等，在蘇木精染色后，給切片以足夠的藍化時間。

        4、伊紅著色淡

        原因：（1）伊紅染液的pH值可能大于5；（2）藍化液殘留過多；（3）切片太??；（4）切片經伊紅染色后在乙醇脫水時間過長。

        處理方法：檢查伊紅染液的pH值，如果必要的話，用乙酸將其調節(jié)在4～5之間，從而使伊紅染色色彩艷麗。確保每次藍化步驟完成后，使用的弱堿性溶液被充分洗去，玻片上沒有殘留的弱堿性溶液。檢查切片的厚度。脫水時不要讓切片在低濃度乙醇停留時間過長，因為含水多的低濃度乙醇會將伊紅的顏色分化掉。

        5、顯微鏡下見切片內有大量水珠

        原因：切片經梯度乙醇處理后沒有完全脫水，導致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。

        處理方法：移去蓋玻片，用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠。將切片置入新鮮的無水乙醇中，待切片重新脫水完全后，用新二甲苯透明，中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體，在使用一定時間以后，應即時更換。

        6、細胞質過染

        原因：（1）伊紅染色液濃度太高，特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在；（2）切片在伊紅染色時間過長；（3）切片在伊紅染色后經乙醇脫水步驟時過的太快，而使乙醇分化伊紅的作用不能產生。

        處理方法：適當稀釋伊紅染色液，減少伊紅染色時間，或者使切片在乙醇脫水等步驟時，停留時間相對均勻。同樣，也要檢查切片的厚度是否合適。

        7、細胞核灰藍

        原因：（1）組織處理溫度過高、過熱，在石蠟停留的時間過長；（2）固定時間太短，接下來就直接在高濃度的乙醇中行脫水處理。

        處理方法：理論上來說，加熱處理僅在組織浸蠟步驟才使用，組織不能在熱的蠟液中停留過長時間。如果由于某些原因不能進行下步包埋處理，完成浸蠟處理后的組織，可將組織連同塑料包埋盒一并放置在室溫空氣中，冷卻凝固，以備包埋。待需要包埋時再重新加溫直至石蠟融化即可。組織在處理前必須確保固定良好，脫水最好能從低濃度的乙醇開始。

        好啦，HE染色的常見問題與處理方法咱們就介紹到這里啦~還有不懂的直接點擊：《HE染色理論+實操》跟著視頻學習哦。有需要HE染色代做外包的同學歡迎留言需求哦。