PCR是生物領域中最基礎，也是尤為重要的一環(huán)
今天給大家講述一些
PCR應該了解的知識 與 實驗出現(xiàn)問題的解決辦法
首先給大家詳細介紹下其原理
PCR（Polymerase Chain Reaction）原理：
即聚合酶鏈式反應，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。
介紹了原理，少不了得說其幾個重要體系成份：
1.模板（Template）：基因組、質(zhì)粒DNA、cDNA、也可以是細菌、組織樣品等。
2.引物（Primer）：確定擴增目的序列打的特異性；確定擴增引物長度。
3.DNA聚合酶（DNA Polymerase）：推動PCR反應進行的機器。
4.緩沖液（Buffer）：控制體系的pH和離子，為DNA聚合酶提供最佳工作環(huán)境。
5.脫氧核苷酸（dNTP）:DNA的基本組成元件，包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP。
6.Mg、K離子增強劑。
而我們在PCR實際操作過程中會遇到很多不可避免的問題，比如說：PCR產(chǎn)物條帶拖尾，有雜帶，更嚴重的是除了marker外，啥條帶都看不到。
那我們應該如何有效的避免出現(xiàn)這些問題呢？
首先得找出出現(xiàn)這些問題的原因，才能有效解決問題。
常見的問題有很多種，但絕大部分能總結出以下幾點。
問題一：完全沒有條帶
1.確認試劑是否存在質(zhì)量問題或者加樣時出錯，導致反應體系不完整。
2.檢查模板DNA是否正確或者存在特殊結構，導致模板與引物無法結合。
3.引物或反應溫度設計不合理。
問題二：有很多非特異性條帶
1.反應體系被污染。
2.引物特異性差。
3.退火溫度不合適。
問題三：目的條帶弱
1.聚合酶活性過低。
2.循環(huán)次數(shù)偏低。
3.模板DNA濃度過低。
問題四：PCR產(chǎn)物出現(xiàn)片狀拖尾
1.DNA聚合酶過多或酶活性差。
2.dNTP和Mg離子濃度過高。
3.退火溫度過低，PCR循環(huán)數(shù)偏多。
4.模板DNA用量過大或模板DNA不純。
5.引物特異性差、引物間形成二聚體導致非特異性擴增。
知道了問題的出現(xiàn)原因，就能有效的針對并改變PCR條件，跑出漂亮的條帶了。最后祝大家，PCR每次都能成功擴出目的條帶。
湘公網(wǎng)安備
