Co-IP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)介紹【附視頻介紹】
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
大家好,今天我們來學(xué)習(xí)一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)——免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation),也就是我們常說的Co-IP實(shí)驗(yàn)。本文由普拉特澤生物分子檢測平臺總結(jié)分享,普拉特澤專業(yè)承接包括coip在內(nèi)的各項(xiàng)分子互作生物實(shí)驗(yàn)代做服務(wù),同時(shí)還開設(shè)了線上下常用實(shí)驗(yàn)操作技能培訓(xùn)班——《春風(fēng)學(xué)院》,文尾附上coip免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)操作視頻供大家學(xué)習(xí),一起來看看吧!
Co-IP是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。
Co-IP的原理當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。Co-IP確定的存在相互作用關(guān)系,但這種相互作用并不能確定使用直接作用還是間接作用。
Co-IP、ChIP、RIP、Pull down作為常見的分子互作驗(yàn)證方法。它們可以從檢驗(yàn)的出發(fā)點(diǎn)來區(qū)分:Co-IP、ChIP、RIP是利用已知的蛋白檢測體內(nèi)相關(guān)蛋白、DNA、RNA,并通過蛋白抗體免疫沉淀分離目標(biāo)蛋白、DNA、RNA。Pull down則是根據(jù)已知RNA(RNA pull down)或者已知蛋白(GST pull down)體外檢驗(yàn)相關(guān)蛋白。Co-IP主要用于檢測蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用,是IP實(shí)驗(yàn)的一種擴(kuò)展, 基于IP反應(yīng)的潛力,在樣品溶液中捕獲和純化主要目標(biāo)(抗原等)及通過天然相互作用靶標(biāo)結(jié)合的其他的大分子。此外,還可以利用Co-IP來確定在不同條件下的蛋白質(zhì)相互作用。
那么Co-IP實(shí)驗(yàn)作為科學(xué)研究蛋白相互作用力的經(jīng)典方式,有哪些優(yōu)缺點(diǎn)呢?
優(yōu)點(diǎn):
(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);
(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響;
(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。
缺點(diǎn):
(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用;
(2)兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;
(3)必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測目的蛋白是什么,以選擇最后檢測的抗體,所以,若預(yù)測不正確,實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果,方法本身具有冒險(xiǎn)性。
(4)靈敏度沒有親和色譜高。
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