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   CO-IP實驗操作注意事項由普拉特澤生物旗下科研培訓(xùn)品牌——《春風(fēng)學(xué)院》為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物分子檢測平臺專門承接Co-IP免疫共沉淀實驗服務(wù)，自成立至今接受Co-IP外包幾百例，積累了大量的實操經(jīng)驗和避免實驗誤差意外的注意事項，今天小編就把這些Co-IP結(jié)果完美的獨門秘籍傳授給大家吧！文尾更附有Co-IP實驗操作視頻教程，快來學(xué)習(xí)吧！

   免疫共沉淀是一種以抗體和抗原識別專一性為基礎(chǔ)，用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。我們在進行實驗的操作時要注意的有：

   1、樣品制備時要注意：細胞裂解要采用溫和的裂解條件，避免破壞細胞內(nèi)存在的蛋白間相互作用，裂解、洗滌時需使用非變性裂解液。此外，由于不同細胞裂解條件不一樣，建議通過預(yù)實驗來確定最佳條件。

   2、抗體固定時要注意的是：抗體的選擇十分重要，選經(jīng)過 IP 驗證的抗體，可以減少假陽性概率。同時，要注意抗體/緩沖液的比例，抗體稀釋過度不利于后續(xù)抗原抗體結(jié)合；而抗體過多就不能完全沉降在固相基質(zhì)上，殘存于上清。操作時，為了避免損傷 beads，使用大口徑或截短槍頭進行加樣。

   3、免疫共沉淀操作時要注意的是：增加在洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入 Triton X-100 ，可以降低非特異性結(jié)合，以防止蛋白在陰性對照樹脂實驗樣品中被檢測到。

確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生。

   4、洗脫與檢測時要注意的是：如后續(xù)需進行酶活或功能性分析，則需使用兼容下游檢測的 Elution buffer 進行洗脫。對于交聯(lián)劑結(jié)合的 beads，為了保持抗體偶聯(lián)樹脂的活性，應(yīng)立即再生和存儲樹脂，保證抗體可以重復(fù)利用。

   那么Co-IP實驗的注意事項我們就講完啦，想要學(xué)習(xí)更詳細的Co-IP實驗過程的同學(xué)歡迎點擊《Co-IP 理論+實操》自行學(xué)習(xí)哦。