闡述siRNA和shRNA在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的使用差異
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,siRNA(小干擾RNA)和shRNA(短發(fā)夾RNA)作為兩種重要的基因沉默工具,它們?cè)谑褂蒙洗嬖谥黠@的差異。普拉特澤生物工具平臺(tái)承接shRNA載體構(gòu)建技術(shù)上百例,早就為大家把實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要踩的雷、吃的虧幫大家吃完了,現(xiàn)在我們就來(lái)看看——
以下是對(duì)這些差異的詳細(xì)闡述:
1. 結(jié)構(gòu)與構(gòu)建方式
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結(jié)構(gòu):siRNA是一種雙鏈RNA分子,長(zhǎng)度通常在21-23個(gè)核苷酸之間,其3'端常有兩個(gè)游離的堿基。這種結(jié)構(gòu)使得siRNA能夠直接與目標(biāo)mRNA結(jié)合,從而引發(fā)RNA干擾(RNAi)效應(yīng)。
構(gòu)建方式:siRNA通常是人工化學(xué)合成的,通過(guò)針對(duì)目標(biāo)基因的特定序列進(jìn)行設(shè)計(jì),確保其與目標(biāo)mRNA的高效結(jié)合。
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結(jié)構(gòu):shRNA是一種具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的單鏈RNA分子,其長(zhǎng)度也在19-25個(gè)核苷酸范圍內(nèi)。這種特殊的莖環(huán)結(jié)構(gòu)使得shRNA在細(xì)胞內(nèi)能夠被Dicer酶識(shí)別并切割成siRNA,進(jìn)而發(fā)揮基因沉默作用。
構(gòu)建方式:shRNA通常是通過(guò)基因克隆技術(shù)構(gòu)建在質(zhì)粒或病毒載體上,這些載體在細(xì)胞內(nèi)能夠持續(xù)表達(dá)shRNA,從而不斷產(chǎn)生siRNA。
2. 作用機(jī)制
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當(dāng)siRNA進(jìn)入細(xì)胞后,它會(huì)與RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)結(jié)合,形成RISC-siRNA復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物能夠特異性地識(shí)別并降解與siRNA互補(bǔ)的目標(biāo)mRNA,從而實(shí)現(xiàn)基因沉默。
?shRNA?:
shRNA進(jìn)入細(xì)胞后,首先被Dicer酶識(shí)別并切割成siRNA。隨后,這些siRNA通過(guò)與RISC結(jié)合,同樣能夠特異性地降解目標(biāo)mRNA。由于shRNA是通過(guò)載體在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)的,因此它能夠不斷地產(chǎn)生siRNA,從而維持更長(zhǎng)時(shí)間的基因沉默效果。
3. 穩(wěn)定性與持久性
?siRNA?:
由于siRNA是化學(xué)合成的,它在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性相對(duì)較低。一旦進(jìn)入細(xì)胞,siRNA會(huì)逐漸被降解,因此其基因沉默效果通常只能維持?jǐn)?shù)天到一周左右。
?shRNA?:
由于shRNA是通過(guò)載體在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)的,因此它能夠不斷地產(chǎn)生siRNA,從而維持更長(zhǎng)時(shí)間的基因沉默效果。在某些情況下,shRNA甚至可以整合到細(xì)胞的基因組中,實(shí)現(xiàn)遺傳性的基因沉默。
4. 應(yīng)用場(chǎng)景
?siRNA?:
適用于需要快速、短期基因沉默效果的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,如急性基因功能研究、藥物篩選等。siRNA的即時(shí)性和高效性使得它成為這些領(lǐng)域中的理想選擇。
?shRNA?:
我們的團(tuán)隊(duì)由經(jīng)驗(yàn)豐富的生物學(xué)家、技術(shù)專(zhuān)家及資深工程師組成,他們不僅擁有深厚的學(xué)術(shù)背景,更具備將理論轉(zhuǎn)化為實(shí)踐的卓越能力。在這里,每一個(gè)細(xì)節(jié)都被精心雕琢,每一次操作都力求完美。
適用于需要長(zhǎng)期、穩(wěn)定基因沉默效果的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,如細(xì)胞系構(gòu)建、基因功能長(zhǎng)期觀察、體內(nèi)基因治療等。shRNA的持續(xù)性和穩(wěn)定性使得它成為這些領(lǐng)域中的重要工具。
綜上所述,siRNA和shRNA在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的使用差異主要體現(xiàn)在結(jié)構(gòu)與構(gòu)建方式、作用機(jī)制、穩(wěn)定性與持久性以及應(yīng)用場(chǎng)景等方面。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體需求和目的,研究人員可以選擇合適的基因沉默工具來(lái)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)工作。
要資質(zhì)有資質(zhì)
要經(jīng)驗(yàn)有經(jīng)驗(yàn)
要案例有案例
好,siRNA和shRNA在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的使用差異就介紹到這里啦~
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