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實時熒光定量 PCR(qPCR)的介紹

2023-03-20 13:08:33

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

           普拉特澤生物為致力為廣大生命科學研究人員提供實時熒光定量PCR外包服務,可根據實方案的要求選擇不同的檢測方法,本文就跟大家一起來看看。

什么是實時熒光定量PCR?



   實時熒光定量 PCR(qPCR)是一種常用的分子生物學技術,用于檢測和定量目標 DNA 的數量。與常規(guī) PCR 不同,qPCR 可以在 PCR 反應進行的同

時測量產生的熒光信號,從而可以實時監(jiān)測 PCR 反應的過程。

   
   
   在 qPCR 中,熒光信號與目標DNA的數量成正比,因此可以使用熒光信號來計算目標DNA的濃度。通常使用兩種方法來檢測熒光信號:SYBR

Green 和探針法。SYBR Green可以結合任何DNA,因此適用于檢測多個目標,而探針法則需要針對特定目標設計探針。

qPCR 通常由以下步驟組成:


   模板 DNA 的制備:通常將 DNA 提取并純化,以獲得高質量的模板 DNA。


   引物和探針的設計:引物和探針是用于擴增和檢測目標 DNA片段的DNA片段。引物需要設計成能夠在目標 DNA 片段的兩端精確結合,并且要有足夠的特異性,以避免與非目標 DNA 片段發(fā)生雜交。


   PCR 反應的設置:PCR反應需要引物、熒光染料和模板 DNA,并且要在恰當的溫度和時間下進行。


   熒光信號的檢測:在 PCR 反應進行的同時,熒光信號也會產生,可以使用qPCR儀器實時檢測。


   數據分析:熒光信號的大小可以用于計算目標 DNA 的濃度,通常使用閾值法或標準曲線法來計算。同時qPCR 技術廣泛應用于生命科學研究和臨床診斷等領域,如基因表達分析、病原體檢測、單核苷酸多態(tài)性分析等。


qPCR應用范圍:
   比如臨床疾病診斷:
各型肝炎、艾滋病、禽流感、結核、性病等傳染病診斷和療效評價;地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測;腫瘤標志物及瘤基因檢測實現(xiàn)腫瘤病診斷;遺傳基因檢測實現(xiàn)遺傳病診斷。


    動物疾病檢測:


    禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。


    食品安全:

   
    食源微生物、食品過敏源、轉基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。


    科學研究:


    醫(yī)學、農牧、生物相關分子生物學定量研究。


    應用行業(yè):


    各級各類醫(yī)療機構、大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。


    由于qPCR是實時定量檢測致病病原體基因核酸,因此它比化學發(fā)光、時間分辨、蛋白芯片等免疫學方法更具獨到優(yōu)勢。


 好啦,實時熒光定量 PCR我們就介紹到這里啦,同學們有沒有一個簡單的了解呢?不懂的可以給客服留言方便為您詳細解答。下一篇再詳細為大家
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