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        植物組織DNA提取步驟由普拉特澤生物技術(shù)分享，DNA全稱是脫氧核糖核酸，普拉特澤生物分子檢測平臺為大家提供各種分子檢測外包實驗，積累了大量實操經(jīng)驗，本文就跟大家分享植物組織DNA提取的實驗步驟~

        一、植物組織DNA提取儀器與設(shè)計準(zhǔn)備

        實驗儀器：高速離心機(jī)；烘箱；冰箱；水浴鍋；高壓滅菌鍋；Nanodrop。

        實驗試劑：玻璃珠，十二烷基磺酸鈉(SDS)；三羥甲基氨基甲烷（Tris）；乙二胺四乙酸（EDTA）；氯化鈉；苯酚；氯仿；無水乙醇等。

        二、植物組織DNA提取步驟

        植物組織的DNA提取通常采用機(jī)械研磨的方法破碎植物的組織和細(xì)胞，由于植物細(xì)胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對 DNA 的抽提產(chǎn)生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強(qiáng)還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并減少研磨過程中各種酶類的作用。詳細(xì)操作步驟如下：

    1、SDS 提取緩沖液在 65℃水浴中預(yù)熱。

    2、將葉片置于 1.5ml 離心管中，液氮速凍，組織研磨器打樣。

    3、加入 700 ml 的 SDS 提取緩沖液，渦旋搖勻。

    4、置于 65℃的水浴中，每隔 10 min 輕輕搖動，30 min 后取出。5.加入 200 ml KAc 溶液，搖勻，放入-20℃冰箱 30 min。

    5、10000 rpm 離心 5 min，上清移至新離心管中，12000 rpm 離心 5 min。

    6、上清移至新離心管中，加入 700 ml 異丙醇， -20℃冰箱 30 min。

    7、10000 rpm 離心 5 min，棄上清，加入 500 ml 70%乙醇漂洗。

    8、棄液體，晾干。

    9、DNA 純度與濃度測定 （使用 nanodrop）。

              DNA 純度：DNA 的 OD260/OD280 一般為 1.8 左右。

              OD260/OD280 ? 1.8：說明較純；

              OD260/OD280 > 1.8：說明可能有 RNA 污染；

              OD260/OD280 < 1.8：說明可能有蛋白質(zhì)污染。

        三、植物組織DNA提取注意

    1. 葉片磨得越細(xì)越好。

    2. 注意移液器的正確使用。

    3. 由于植物細(xì)胞中含有大量的 DNA 酶，因此，除在抽提液中加入 EDTA 抑制酶的活性外，第一步的操作應(yīng)迅速，以免組織解凍，導(dǎo)致細(xì)胞裂解，釋放出 DNA 酶，使 DNA 降解。

    好啦，那植物組織DNA提取步驟就講完啦，如果您還有其他的問題或有分子檢測實驗外包的需求歡迎隨時聯(lián)系普拉特澤生物~