細(xì)胞增殖檢測(cè)之EdU法及其應(yīng)用
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
前兩篇我們總結(jié)了檢測(cè)EDU技術(shù)的方法以及EDU檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果是如何分析的,今天來(lái)學(xué)習(xí)細(xì)胞增殖檢測(cè)時(shí)關(guān)于EdU法及其應(yīng)用,讓我們一起來(lái)回顧一下看看吧,溫故而知新。
一、了解細(xì)胞增殖的新視角 —— 檢測(cè)EDU技術(shù)的方法
二、EDU檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果如何分析?
鏈接奉上,大家快點(diǎn)踩著普拉特澤的肩膀去摘蘋(píng)果吧!那現(xiàn)在我們來(lái)接著總結(jié):
EdU法是一種基于細(xì)胞內(nèi)新合成DNA的標(biāo)記方法,用于評(píng)估細(xì)胞的增殖活性。之前我們也提到EdU的原理簡(jiǎn)介,讓我們?cè)賱?wù)實(shí)一下基礎(chǔ)吧!過(guò)下面將詳細(xì)介紹EdU法的原理和應(yīng)用。
原理: EdU(5-乙炔基-2’-脫氧尿苷)是一種類(lèi)似于脫氧尿苷(dU)的核苷酸,它具有一個(gè)乙炔基團(tuán)。在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加EdU后,細(xì)胞會(huì)主動(dòng)攝取EdU并將其嵌入到新合成的DNA鏈中。與傳統(tǒng)的BrdU法不同,EdU法不需要使用酸性脫氧核糖核酸酶(DNase)來(lái)使DNA鏈斷裂,因此可以避免DNA斷裂的非特異性效應(yīng)。
在EdU法中,通過(guò)使用熒光染料或特定的抗體與EdU結(jié)合,可以將EdU標(biāo)記的DNA可視化。這種結(jié)合可以通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)實(shí)現(xiàn),其中EdU上的乙炔基與標(biāo)記物上的點(diǎn)擊試劑(例如,含有偶氮基團(tuán)的染料或生物素)發(fā)生共軛反應(yīng)。通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細(xì)胞術(shù)分析,可以計(jì)算標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量,從而評(píng)估細(xì)胞的增殖活性。
EdU法在細(xì)胞生物學(xué)研究中有廣泛的應(yīng)用。以下是一些常見(jiàn)的應(yīng)用領(lǐng)域:
細(xì)胞增殖評(píng)估:通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量,可以定量評(píng)估細(xì)胞的增殖活性。這對(duì)于研究細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制、細(xì)胞增殖的動(dòng)力學(xué)過(guò)程以及評(píng)估細(xì)胞增殖抑制劑的效果非常有用。
組織再生研究:EdU法可以用于研究組織再生過(guò)程中的細(xì)胞增殖。例如,在小鼠肝臟再生研究中,可以通過(guò)注射EdU來(lái)標(biāo)記再生肝細(xì)胞,并通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量來(lái)評(píng)估肝臟再生的程度。
腫瘤生長(zhǎng)研究:EdU法可以用于研究腫瘤細(xì)胞的增殖活性。通過(guò)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞中的EdU,可以觀(guān)察腫瘤細(xì)胞的增殖速率,并評(píng)估抗腫瘤藥物的療效。
發(fā)育過(guò)程研究:EdU法可以用于研究發(fā)育過(guò)程中的細(xì)胞增殖。例如,在胚胎發(fā)育研究中,可以通過(guò)注射EdU來(lái)標(biāo)記正在增殖的細(xì)胞,并通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量來(lái)研究胚胎發(fā)育的動(dòng)態(tài)過(guò)程。
關(guān)于EdU 檢測(cè)應(yīng)用:
【1】將EdU作為細(xì)胞增殖的分子探針,應(yīng)用于高含量的siRNA (high-content siRNA, HCS)篩選實(shí)驗(yàn),對(duì)細(xì)胞增殖進(jìn)行評(píng)估。
【2】Wiebusch等使用EdU和流式細(xì)胞儀研究人巨細(xì)胞病毒細(xì)胞周期的基因表達(dá)。EdU在用于檢測(cè)細(xì)胞增殖的很多實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮了突出的作用,展現(xiàn)了其廣闊的應(yīng)用前景。
【3】EdU標(biāo)記技術(shù)在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用是最基本的,Hiraoka等【3】用EdU標(biāo)記非雄激素依賴(lài)型前列腺癌PC3細(xì)胞, 根據(jù)低氯離子濃度的培養(yǎng)基組, DNA中有EdU摻入的細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組減少, 得出低氯離子濃度會(huì)延長(zhǎng)細(xì)胞周期的各個(gè)階段, 而導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞周期的終止。
【4】Zeng等用EdU標(biāo)記法檢測(cè)成體動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞增殖, 并與傳統(tǒng)的BrdU標(biāo)記方法相對(duì)照, 充分肯定了EdU用于檢測(cè)細(xì)胞增殖的可行性。
【5】在植物細(xì)胞培養(yǎng)中, Kotogány等通過(guò)用EdU標(biāo)記植物細(xì)胞(玉米、水稻、擬南芥等)進(jìn)行實(shí)驗(yàn), 相對(duì)于3H-TdR和BrdU,EdU檢測(cè)植物細(xì)胞增殖不需要進(jìn)行細(xì)胞壁的消化,節(jié)省了DNA變性的步驟,減少了整個(gè)細(xì)胞增殖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的時(shí)間, 更有效并真實(shí)地展示了細(xì)胞、細(xì)胞核以及染色體的形態(tài)學(xué)特征。
綜上所述,EdU標(biāo)記S期細(xì)胞及檢測(cè)細(xì)胞增殖是一種可靠、通用、快速、簡(jiǎn)單以及沒(méi)有放射性的方法,同時(shí)可以結(jié)合其他標(biāo)記進(jìn)行多參數(shù)的分析, 具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確和兼容的特點(diǎn), 適合多種研究方式和多層次分析, 這一方法必將在細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)和病毒復(fù)制等方面的研究中發(fā)揮重要作用
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