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        今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是細胞衰老的檢測方法。細胞衰老時，細胞的各種結(jié)構(gòu)呈退行性變化，根據(jù)其特征，我們常用于檢測衰老的方法主要是β-半乳糖苷酶活性檢測和端粒長度的檢查兩個，我們來一個一個看：

一、β-半乳糖苷酶活性測定

 1995年，Dimiri等發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)二倍體成纖維細胞在培養(yǎng)基pH值為6時，其β-半乳糖苷酶染色的陽性率隨代齡增加而逐漸上調(diào)，他們把這種中性β-半到糖苷酶定義為SAβ-gal，即衰老相關(guān)的β-半到糖荷酶，衰老細胞或組織產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X-Gal，生成深藍色產(chǎn)物，從而在光學顯微鏡下很容易觀察到。在人體表皮角質(zhì)層細胞中，也可以發(fā)現(xiàn)SA-β-gal隨年齡的增加而增加。并目，SA-β-gal不依賴干DNA復(fù)制，可以區(qū)分衰老細胞與靜止期的細胞。

 SA-β-gal是一種體內(nèi)體外都適用的檢測衰老的生物標記物。由于檢測SA-β-gal的方法簡單易行，其在檢測衰老細胞方面有很廣泛的應(yīng)用。

 二、端粒長度的檢查

 端粒是位于真核細胞染色體末端頂部的核蛋白結(jié)構(gòu)，由高度保守的TTAGGG 重復(fù)序列組成，其存在可以保護染色體末端，是維持染色體穩(wěn)定的重要因素。鑒于端粒的特殊結(jié)構(gòu)，端粒的長度會隨著每次細胞的分裂而縮短，因此，端粒長度是衰老的一個重要生物標志。這里我們主要討論端粒限制性片段(TRF)分析及熒光原位雜交(FISH)法。

首先是端粒限制性片段分析：TRF分析也稱作端粒的Southern印跡法，是應(yīng)用針對端粒重復(fù)序列的探針來檢測限制性酶切后所保留的端粒的方法。限制性酶會將基因組DNA消化為短的片段，留下大量完好的端粒，即所謂的端粒限制性片段。以凝膠電泳分離基因組片段，通過放射性探針(CCCTAA)。雜交“TTAGGG”重復(fù)序列的方式可以檢測到端粒的存在。鑒于細胞的異質(zhì)性，TRFs的大小不一，反映出細胞中端粒長度的不同。TRF分析對試劑和儀帶無特殊要求，因此這種方法目前有看較為廣泛的應(yīng)用，但它存在一些缺陷，TRE分析測量的是整個樣品端粒長度的平均值，由于不同端粒的長度相差很大，這種方法既不能分辨單個端粒也不能分辨單個細胞內(nèi)端粒的平均長度。鑒于短端粒在電泳遷移中不集中且雜交信號弱，這種方法很難檢測到在衰老研究中尤為重要的短端粒。另外，這種方法還存在操作復(fù)雜，所需樣品量大等缺陷，相比之下，FISH技術(shù)樣品用量小直觀、敏感，可以檢測染色體問端粒長度的變化。

 熒光原位雜交：FISH端粒長度分析基于熒光肽核酸探針(PNA)的特導(dǎo)性標記。PNA探針是DNA同源的合成肽鏈，其中DNA帶負電的磷酸戊糖骨架被不帶由的N-2胺乙基甘氨酸骨架所取代，這樣的修飾產(chǎn)生了非常穩(wěn)定高效的針對靶DNA 的特異性雜交。PNA探針發(fā)出的熒光信號與所雜交的端粒長度直接相關(guān)，因此這種方法可用于測量端粒的長度，FISH不但可以應(yīng)用于單細胞水平的單個染色體端粒長度的測量，還可應(yīng)用于組織勻漿及組織切片。

 OK！那關(guān)于細胞衰老實驗檢測的方法我們就學習到這里啦，如果您也有自己的想法或者需要細胞衰老實驗外包的需求歡迎隨時給我們留言！