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        大家好，今天普拉特澤生物繼續(xù)跟大家一起來(lái)學(xué)習(xí)生物醫(yī)學(xué)研究的新熱點(diǎn)——細(xì)胞焦亡。本文由普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)給大家詳細(xì)分享，文尾附有細(xì)胞焦亡概述、文獻(xiàn)、方法打包視頻供大家學(xué)習(xí)，現(xiàn)在我們就來(lái)學(xué)習(xí)細(xì)胞焦亡的研究方法與檢測(cè)方式吧！

        首先是細(xì)胞焦亡的特點(diǎn)：

        細(xì)胞焦亡發(fā)生時(shí)，細(xì)胞會(huì)發(fā)生腫脹，在細(xì)胞破裂之前，細(xì)胞上形成凸出物(圖1，早期細(xì)胞焦亡)，之后細(xì)胞膜上形成孔隙，使細(xì)胞膜失去完整性，釋放內(nèi)容物，引起炎癥反應(yīng)，此時(shí)，細(xì)胞核位干細(xì)胞中央(圖1，晚期細(xì)胞焦亡)，隨著形態(tài)學(xué)的改變，細(xì)胞核固縮，DNA斷裂。

        細(xì)胞焦亡過(guò)程，具有caspase-1依賴(lài)性。在外界條件的刺激下，caspase-1前體可以與模式識(shí)別受體NLRP1、NLRP3等通過(guò)接頭蛋白ASC變?yōu)橐粋€(gè)高分子復(fù)合物，即炎癥小體，也稱(chēng)依賴(lài) caspase-1的炎癥小體。細(xì)胞在caspase-1激活同時(shí)會(huì)釋放出炎性因子白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1βIL-1)和IL-18，進(jìn)而吸引更多的炎性細(xì)胞，加重炎癥反應(yīng)。焦亡發(fā)生時(shí)形成子隙，它允許細(xì)胞質(zhì)的內(nèi)容物，如乳酸脫氣酶(lactate dehvdrogenase，LDH)和炎性細(xì)胞因子釋放，熒光標(biāo)記的膜朕蛋白V，7-氨基放線(xiàn)菌D或碘化丙啶進(jìn)入細(xì)胞。

        其次是細(xì)胞焦亡的信號(hào)通路：

        細(xì)胞焦亡屬于炎癥性死亡途徑，按激活機(jī)制，可分為Caspase-1依賴(lài)和不依賴(lài)兩種途徑。兩種途徑都是通過(guò)切割GSDMD后形成N端游離的肽殷，這一肽殷會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞形成孔道并導(dǎo)致細(xì)胞破裂，釋放胞質(zhì)成分。兩種途徑都能同時(shí)誘導(dǎo)IL-1B和IL-18的前體進(jìn)行切割，形成成熟的IL-1和IL-18。不同的只是是否直接激活Caspase-1。

        然后就是我們本文的重點(diǎn)，細(xì)胞焦亡的研究方法：

        細(xì)胞焦亡的機(jī)制中GSDMD的切割，IL-1B和IL-18前體的切割成熟和釋放是關(guān)鍵信號(hào)，因此證明所誘發(fā)的細(xì)胞死亡方式是否為細(xì)胞焦亡，需要幾個(gè)關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)證據(jù):

        (1)GSDMD的切割(Western檢測(cè));

        (2)Caspase的激活，主要是Caspase-1，Caspase-4，Caspase-5，Caspase-11。(Western檢測(cè));

        (3)IL-1β和IL-18前體的切割成熟和釋放(Western，ELISA等);

        (4)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)(CCK-8等);

        (5)染色質(zhì)完整性檢測(cè)(Tunel等)。

        而細(xì)胞焦亡完整檢測(cè)方式如下:

        1、形態(tài)變化

        (1)掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài);

        (2)免疫熒光染色(GSDMD/GSDME);

        (3)Tunel檢測(cè);

        2、檢測(cè)焦亡相關(guān)基因及蛋白

        (1)q-PCR/Western Blot方法檢測(cè)焦亡相關(guān)基因或蛋白的表達(dá)水平(例如，Caspase-14、5、11;GSDMD;Cleaved Caspase-3IL-1BIL-18NLRP3ASC等);

        (2)ELISA試劑盒檢測(cè)炎癥因子的水平;(3)CCK8法測(cè)定細(xì)胞活力;

        (3)免疫組化檢測(cè)組織蛋白的表達(dá)。

        細(xì)胞焦亡的研究方法與檢測(cè)方式我們就講完啦，想學(xué)習(xí)更多細(xì)胞焦亡內(nèi)容的可點(diǎn)擊《細(xì)胞焦亡專(zhuān)題》全面學(xué)習(xí)呀，有更多的建議或者關(guān)于細(xì)胞焦亡研究?jī)?nèi)容的補(bǔ)充歡迎給客服留言，歡迎探討哦。