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  外泌體提取步驟由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物長(zhǎng)期承接各種樣本外泌體提取純化與鑒定服務(wù)，積累大量的實(shí)操經(jīng)驗(yàn)，本文就來給大家分享一下外泌體提取的步驟：
   一、什么是外泌體？

  外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為 30-200 nm，密度在 1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞)，都可以產(chǎn)生并釋放 exosome。目前外泌提取主要有超速離心、過濾離心、試劑盒提取等方法。

        二、實(shí)驗(yàn)流程

        血清/血漿樣本：

        1. 分離得到血漿/血清。

        2. 低速離心去除碎片及雜質(zhì)。

        3. 超速離心獲得外泌體沉淀。

        4. 外泌體純化。

        5. BCA法檢測(cè)外泌體濃度。

        培養(yǎng)上清樣本：

        1. 培養(yǎng)液收集。

        2. 低速離心去除細(xì)胞、碎片及雜質(zhì)。

        3. 超速離心獲得外泌體沉淀。

        4. 外泌體純化。

        5. BCA法檢測(cè)外泌體濃度。

  即在 4℃下，首先 300×g 離心10min，吸取上清液，然后2000×g離心10 min；吸取上清液后，10 000×g高速離心30min，吸取上清液；140000×g超速離心90 min；除去上清液，所獲得的沉淀即為外泌體。用PBS緩沖液洗滌沉淀并重懸后，140000×g再次離心90 min，100μLPBS緩沖液重懸沉淀，凍存于-80℃?zhèn)溆谩?/span>

  外泌體提取過程說難不難，但因?yàn)?/span>樣本量量少或樣本特殊的原因很多情況下很難提取出來，所以如果您有外泌體提取的需求歡迎隨時(shí)咨詢普拉特澤生物~