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 Transwell遷移實驗報告由普拉特澤生物給大家解答與分享，普拉特澤生物細胞檢測可承接各種細胞外包服務(wù)，包括CCK8/mtt/細胞增殖檢測、原代細胞分離培養(yǎng)與鑒定、細胞周期等實驗外包服務(wù)，本文繼續(xù)給大家?guī)黻P(guān)于Transwell遷移實驗報告，快來收藏吧！

一、實驗?zāi)康?/strong>

通過Transwell實驗檢測Hela細胞轉(zhuǎn)染CDC20-sgRNA3或SP600125處理后其遷移能力的變化。

二、實驗樣品及分組

1.實驗樣本

備注：包括干預(yù)細胞用的相關(guān)試劑均按實驗樣品登記，每行登記一個或一組獨立樣品

2. 實驗分組

細胞：Hela

分組：sgRNA-NC、CDC20-sgRNA3

處理：Con（0.1% DMSO）、SP600125處理（20 μM，48h）

三、實驗結(jié)果

各組侵襲實驗結(jié)果圖（100×）

各組遷移實驗結(jié)果柱形圖（遷移數(shù)）

四、實驗材料

1. 主要實驗儀器

2.主要實驗試劑及耗材

五、實驗原理

陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室最方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法；由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。

遷移：Transwell小室上室種腫瘤細胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力

六、實驗步驟

1.細胞復(fù)蘇

(1) 將ddH₂O預(yù)溫至37℃。

(2) 戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細胞的凍存管（內(nèi)有1 mL細胞混合液），立即投入37℃ ddH₂O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內(nèi)快速溶解。

(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進超凈臺。

(4) 在超凈臺中，在15 mL滅菌離心管中預(yù)先加入10 mL新鮮配制的培養(yǎng)基，打開凍存管，將所有凍融的細胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養(yǎng)液。

(5) 1mL培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細胞培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)基至5 mL，置于37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

(6) 48小時后換液，細胞融合接近80%時即可傳代。

2. 細胞培養(yǎng)

Hela細胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基在37℃飽和濕度、含5%CO₂的孵箱中培養(yǎng)。

3. 細胞轉(zhuǎn)染及收樣

(1) 鋪板：處于對數(shù)生長期的目的細胞，胰蛋白酶消化成單細胞懸液，按實驗需要接種于6孔板（2×10⁵個細胞/孔），根據(jù)細胞大小和形狀調(diào)整接板細胞量。

(2) 培養(yǎng)：37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，待細胞長至50%~60%匯合度進行轉(zhuǎn)染。

(3) 質(zhì)粒和脂質(zhì)體準備：用125μL不含血清的培養(yǎng)基孵育4μg目的片段；125μL不含血清的培養(yǎng)基孵育8μL Lipo漢恒，靜置5min；將含質(zhì)粒和含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基混合，混勻后室溫靜置20min。

(4) 棄去板中原有培養(yǎng)基，把混合液加入到細胞培養(yǎng)板中；4~6h后換成完全培養(yǎng)基。

(5) 繼續(xù)培養(yǎng)24-48h。

4. 遷移實驗

(1) 胰酶消化收集狀態(tài)良好的目的細胞（已轉(zhuǎn)染），制成單細胞懸液（無血清培養(yǎng)基配置，藥物處理組含藥物）；上室加200μL已調(diào)節(jié)好細胞密度的細胞懸液（7×10³個）；下室加500μL全培養(yǎng)基（小室外，24孔板孔內(nèi)；藥物處理組含藥物）。

(2) 于37℃、5% CO₂細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)相應(yīng)時間；

(3) 用4%多聚甲醛室溫固定20 min，用棉簽輕柔擦拭以去除小室內(nèi)未遷移過去的細胞，注意操作以免刺穿底層聚碳酸酯膜；

(4) 在新的24孔板孔中加500μL結(jié)晶紫，室溫染色10 min；

(5) 用PBS沖洗掉小室上多余的染料，置于空氣中晾干；

(6) 100倍顯微鏡拍照，再用PS計數(shù)，計算各孔穿過膜的細胞數(shù)量。

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