如何建立穩(wěn)定的腦缺血再灌注損傷模型？關(guān)鍵技巧分享
2025-04-21 17:35:30
來(lái)源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
如何建立穩(wěn)定的腦缺血再灌注損傷模型由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)專(zhuān)業(yè)承接裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)外包、動(dòng)物造模等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)，積累專(zhuān)業(yè)豐富的實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)，腦缺血再灌注損傷決方案，幫助研模型是研究腦卒中病理機(jī)制和藥物評(píng)價(jià)的重要工具。本文將詳細(xì)介紹建立穩(wěn)定可靠的腦缺血再灌注損傷模型的關(guān)鍵技巧，包括動(dòng)物選擇、手術(shù)操作要點(diǎn)、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和常見(jiàn)問(wèn)題解究人員提高模型成功率和實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。
一、模型建立前的準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇
品系選擇：
大鼠：首選SD或Wistar大鼠（體重280-320g）
小鼠：C57BL/6（體重22-25g）
年齡控制：選擇12-14周齡成年動(dòng)物
飼養(yǎng)環(huán)境：恒溫（23±1℃）、恒濕（50±10%）、12h/12h光暗周期
適應(yīng)性飼養(yǎng)：至少3天適應(yīng)期
2. 主要試劑與儀器
①必備器械：
顯微手術(shù)器械套裝
體溫維持系統(tǒng)
激光多普勒血流儀
血?dú)夥治鰞x
②關(guān)鍵試劑：
水合氯醛/異氟烷麻醉劑
肝素鈉溶液
硅膠涂覆尼龍線(xiàn)栓（直徑規(guī)格匹配動(dòng)物體重）
二、標(biāo)準(zhǔn)化手術(shù)操作流程（以MCAO線(xiàn)栓法為例）
1. 麻醉與術(shù)前處理
麻醉方案：
誘導(dǎo)：4%異氟烷
維持：1.5-2%異氟烷（推薦吸入麻醉）
術(shù)前用藥：
阿托品（0.05mg/kg，sc）減少呼吸道分泌物
肝素鈉（50U/kg，ip）預(yù)防血栓形成
2. 手術(shù)關(guān)鍵步驟
頸部正中切口（約1.5cm）
分離頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）
ECA遠(yuǎn)端結(jié)扎并剪斷（形成"殘端"）
ICA近端臨時(shí)阻斷（微動(dòng)脈夾）
線(xiàn)栓插入（從CCA分叉處向ICA推進(jìn)）：
▲大鼠：插入深度18-20mm
▲小鼠：插入深度10-12mm
▲固定線(xiàn)栓（結(jié)扎CCA近心端）
3. 再灌注操作
缺血時(shí)間控制：
短暫性缺血：通常60-90分鐘
永久性缺血：不拔出線(xiàn)栓
再灌注技巧：
緩慢拔出線(xiàn)栓（約30秒）
觀察ICA血流恢復(fù)（激光多普勒確認(rèn)）
三、提高模型穩(wěn)定性的關(guān)鍵技巧
1. 血流監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化
激光多普勒使用要點(diǎn)：
探頭固定于顱骨（前囟后2mm，右側(cè)3mm）
基線(xiàn)血流記錄≥10分鐘
成功標(biāo)準(zhǔn)：血流下降>70%基線(xiàn)
2. 生理參數(shù)控制
核心指標(biāo)：
體溫維持（37±0.5℃）
血氧飽和度（>95%）
動(dòng)脈血?dú)猓╬H 7.35-7.45）
血糖（4-8mmol/L）
3. 線(xiàn)栓選擇與處理
線(xiàn)栓直徑：
●大鼠：0.28-0.30mm
●小鼠：0.20-0.22mm
●硅膠頭端處理：
長(zhǎng)度：大鼠0.3-0.4mm，小鼠0.2-0.3mm
烘烤固化（60℃，24h）
四、質(zhì)量控制與評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)
1. 模型成功標(biāo)準(zhǔn)
急性期評(píng)估（24h）：
神經(jīng)功能評(píng)分≥2分（Bederson評(píng)分）
TTC染色梗死體積>20%同側(cè)半球
2.排除標(biāo)準(zhǔn)：
蛛網(wǎng)膜下腔出血
術(shù)中死亡
未達(dá)到血流下降標(biāo)準(zhǔn)
2. 常見(jiàn)問(wèn)題解決方案
問(wèn)題
①高死亡率 線(xiàn)栓插入過(guò)深 調(diào)整插入深度，術(shù)前訓(xùn)練
②梗死體積變異大 體溫波動(dòng) 加強(qiáng)術(shù)中體溫監(jiān)控
③再灌注失敗 血栓形成 優(yōu)化肝素用量，線(xiàn)栓硅膠化處理
④神經(jīng)評(píng)分不一致 評(píng)估主觀性 采用盲法，多人評(píng)分
五、術(shù)后護(hù)理與長(zhǎng)期觀察
1. 術(shù)后管理要點(diǎn)
鎮(zhèn)痛處理：布托啡諾（0.1mg/kg，sc）
補(bǔ)液支持：生理鹽水（2ml，sc）
飲食調(diào)整：軟食喂養(yǎng)3天
2. 長(zhǎng)期觀察指標(biāo)
行為學(xué)測(cè)試時(shí)間窗：
急性期：1-3天
亞急性期：7-14天
慢性期：28天
推薦測(cè)試：
改良神經(jīng)嚴(yán)重程度評(píng)分（mNSS）
轉(zhuǎn)角試驗(yàn)
足失誤測(cè)試
六、模型驗(yàn)證與優(yōu)化建議
1. 多模態(tài)驗(yàn)證
影像學(xué)驗(yàn)證：
MRI（DWI序列檢測(cè)早期缺血）
PET（代謝活性評(píng)估）
分子水平驗(yàn)證：
缺血半暗帶標(biāo)志物（HIF-1α）
凋亡相關(guān)蛋白（Caspase-3）
2. 技術(shù)創(chuàng)新方向
光化學(xué)誘導(dǎo)法：更精確的梗死定位
內(nèi)皮素-1模型：無(wú)創(chuàng)誘導(dǎo)
微創(chuàng)技術(shù)：血管內(nèi)介入法
建立穩(wěn)定的腦缺血再灌注損傷模型需要精細(xì)的手術(shù)操作、嚴(yán)格的參數(shù)控制和系統(tǒng)的質(zhì)量評(píng)估。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化操作流程和關(guān)鍵技巧的應(yīng)用，可顯著提高模型的成功率和可重復(fù)性，為腦卒中研究提供可靠的工具。
好啦，穩(wěn)定的腦缺血再灌注損傷模型咱們就介紹完啦，如果您也對(duì)腦缺血再灌注損傷模型感興趣或正在準(zhǔn)備腦缺血再灌注損傷模型的話(huà)歡迎隨時(shí)咨詢(xún)普拉特澤生物、或者手動(dòng)掃碼~
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