流式檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)——細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)外包
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
流式檢測細(xì)胞周期的注意事項(xiàng)由普拉特澤生物根據(jù)承接的幾千例流式檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)和各種實(shí)驗(yàn)過程中的技術(shù)咨詢總結(jié)而來,普拉特澤生物專注提供線下生物實(shí)驗(yàn)研究,積累了大量經(jīng)驗(yàn),為廣大科研工作者提流式檢測細(xì)胞周期等各類生物學(xué)實(shí)驗(yàn)外包。
那么今天的流式檢測細(xì)胞周期注意事項(xiàng)我們分為兩個(gè)方面為大家解讀:
一、流式檢測細(xì)胞樣本的制備的注意事項(xiàng)
1、根據(jù)不同的檢測細(xì)胞調(diào)整合適的溫度、濕度、酸堿度等培養(yǎng)環(huán)境,注意一定要無菌的環(huán)境培養(yǎng)。
2、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),以對(duì)數(shù)期處理為宜,避免細(xì)胞量過少導(dǎo)致收集細(xì)胞量不足或者細(xì)胞量過多導(dǎo)致細(xì)胞開始大量死亡造成的實(shí)驗(yàn)誤差。
2、流式檢測細(xì)胞周期上機(jī)檢測所需收集細(xì)胞量較多,收集細(xì)胞時(shí)盡量多收集一些
3、流式檢測對(duì)細(xì)胞離心,重懸次數(shù)較多,注意動(dòng)作輕緩,避免過多地?fù)p傷、弄破細(xì)胞。
4、本實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞離心,重懸次數(shù)較多,注意動(dòng)作輕緩,避免過多地?fù)p傷細(xì)胞。
5、細(xì)胞周期待測細(xì)胞盡量要獲得單個(gè)細(xì)胞,避免DNA的降解。
6、樣本最關(guān)鍵的就是減少碎片(EDTA/不可過度吹打/離心rpm)。PI既能與DNA結(jié)合,又能與RNA結(jié)合,所以要用RNase降解。PI質(zhì)量及RNase所加量很重要,建議用商品化試劑。
7、污染脫氧核糖核酸酶會(huì)降解DNA,故玻璃器皿和試劑要干凈滅菌。
8、染液等物質(zhì)有一定毒性,注意防護(hù)。
二、流式檢測時(shí)的注意事項(xiàng):
1、固定時(shí)必須預(yù)冷PBS重懸打入無水乙醇中,二者順序不可顛倒。
2、固定后細(xì)胞雖然可以保存較長時(shí)間后再上機(jī)檢測,為避免不可控因素影響最好盡早上機(jī)檢測。
3、進(jìn)樣速度:一般檢測細(xì)胞濃度調(diào)整為2*10^5到2*10^6/mL,進(jìn)樣速度為低速。若峰形較寬,可能就是進(jìn)樣速度太快。
4、儀器質(zhì)控定期做,盡可能排除因機(jī)器設(shè)置引起的峰形加寬。排除粘連細(xì)胞(FL2-A/FL2-W)。
5、通過電壓脈沖信號(hào)的寬度和面積區(qū)別實(shí)體組織標(biāo)本中的粘連細(xì)胞群體,最大程度的減少粘連細(xì)胞帶來的假陽性結(jié)果。
到這里,用流式檢測細(xì)胞周期操作過程中我們要注意的問題就講完了,學(xué)習(xí)流式檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)步驟可點(diǎn)擊此處跳轉(zhuǎn),如果朋友們還有新的問題或要補(bǔ)充的注意事項(xiàng)可以隨時(shí)聯(lián)系我們的客服小姐姐補(bǔ)充交流學(xué)習(xí)哦。當(dāng)然如果您有細(xì)胞周期檢測等實(shí)驗(yàn)外包的需求,普拉特澤隨時(shí)為您服務(wù)。