甲苯胺藍染色步驟
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
甲苯胺藍染色步驟由普拉特澤生物病理實驗平臺為大家總結(jié)分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定的番紅固綠染色外包實驗服務(wù)
本文給大家分享咱們技術(shù)長期總結(jié)下來的動物組織番紅固綠組織染色實驗步驟:
甲苯胺藍染色在組織學(xué)和細胞學(xué)實驗中可是個重頭戲,它能幫助我們清晰地觀察到細胞的結(jié)構(gòu)和成分。
一、準備階段?
⒈獲取待染色的組織標本,這可以是活體組織或已經(jīng)固定的組織切片。
⒉將組織標本進行固定,常用的固定劑有10%緩沖福爾馬林溶液或4%的緩沖乙醛溶液。固定時間根據(jù)組織的大小和類型而定,一般為數(shù)小時至過夜。
二、脫水與滲透?
Step1:將固定后的組織標本進行脫水處理,常用的脫水劑為乙醇。脫水過程中,逐漸將組織標本從低濃度的乙醇轉(zhuǎn)移到高濃度的乙醇中,直至完全脫水。
Step2:將脫水后的組織標本進行滲透處理,常用的滲透劑為二甲苯。將組織標本逐漸轉(zhuǎn)移到二甲苯中,確保組織完全滲透。
?包埋與切片?
Step3:將滲透后的組織標本進行包埋處理,常用的包埋劑為石蠟。
Step4:將包埋后的組織標本進行切片,切片厚度一般為4~6微米。切片工具常用的是組織切片機。
1)脫蠟至水?
Step5:將切片放入二甲苯中浸泡脫蠟,一般需要經(jīng)過三個二甲苯缸,每個缸浸泡5~10分鐘。
Step6:使用無水乙醇、95%乙醇和75%乙醇依次浸泡切片,每個濃度浸泡1分鐘左右,目的是去除切片上的二甲苯,并使切片逐漸水化。
用自來水沖洗切片數(shù)秒,洗去殘留的乙醇。
2?)染色?
Step7:將切片放入甲苯胺藍染色液中,染色時間通常為20~30分鐘。具體時間可根據(jù)實驗需求和切片情況適當調(diào)整。
Step8:在染色過程中,要確保切片完全浸泡在染色液中,并輕輕搖動染色缸,使染色更加均勻。
?3)分化?
Step9:染色完成后,使用95%乙醇或1%鹽酸酒精進行分化,去除多余的染料。分化過程中要在顯微鏡下觀察切片,控制分化效果。分化時間不宜過長,避免過度分化導(dǎo)致染色過淺。
?脫水透明
Step10:將分化后的切片再次放入無水乙醇中脫水,確保切片上的水分被完全去除。
Step11:將脫水后的切片放入二甲苯中進行透明處理,一般需要經(jīng)過三個二甲苯缸,每個缸浸泡1~2分鐘。透明過程中要確保切片完全浸泡在二甲苯中,使切片變得透明清晰。
4?)封片與觀察?
Step12:在石蠟切片的中央滴加一滴中性樹膠,然后蓋上蓋玻片進行封固。封片時要避免產(chǎn)生氣泡,以免影響觀察效果。
Step13:封片完成后,將切片放在顯微鏡下觀察。在顯微鏡下,你可以清晰地看到細胞核被染成藍色,肥大細胞等特定細胞結(jié)構(gòu)也呈現(xiàn)出獨特的染色效果。
怎么樣?甲苯胺藍的染色步驟是不是既詳細又清晰呢?只要按照上述步驟操作,你就能輕松掌握這項技術(shù)啦:18570028002(甲苯胺藍的染色實驗指導(dǎo))
記得在實驗過程中要注意安全哦!