GST-puiidown和coip有何區(qū)別?
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
提問:GST-puiidown和coip有何區(qū)別?
GST pull-down和co-immunoprecipitation(co-IP)都是目前常用的蛋白質(zhì)交互作用檢測方法,它們的區(qū)別在于:
1. GST pull-down通常用來檢測大量的非特異性蛋白質(zhì)與目標蛋白相互作用。GST是一種載體蛋白,可以通過將其連接到表達靶蛋白上,在混合
物中捕獲與該靶蛋白有相互作用的其他蛋白質(zhì)。之后,利用GST標記的固定矩陣,用于分離以GST為基礎(chǔ)的復(fù)合物。而CO-IP則主要用于檢測兩個
或多個具有特異性結(jié)合關(guān)系的重要蛋白質(zhì)的交互。通常使用一種抗體將其中一個蛋白質(zhì)沉淀下來形成復(fù)合物,再使用其它方法分離所形成的復(fù)
合物
2. GST pull-down可檢測到利用嚙齒動物細胞從組織中獲得的細胞勻漿等,而CO-IP主要是進行蛋白免疫染色實驗,并且其靈敏度也更高。
3. CO-IP通常只能采用單個抗體,用于檢測特定的 相互作用 ,而GST pull-down使用基礎(chǔ)載體蛋白質(zhì)的普遍性使其不局限于特定的相互作用關(guān)
系
4. GST pull-down技術(shù)雖然是一種較為簡單,快速、經(jīng)濟的篩查方法,但受到靶蛋白選擇性和專一性影響較大,需要根據(jù)實驗需求進行配合與
補充
綜上所述,GST pull-down適用于快速篩查靶蛋白的交互作用,并且通常會引導(dǎo)復(fù)雜的分析 。而CO-IP可以更加精確地分析兩種特定蛋白之間的
相互作用,對于分析協(xié)同作用非常方便。
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