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    非酒精性脂肪肝病(NAFLD)動(dòng)物模型的造模時(shí)間是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素。普拉特澤生物動(dòng)物平臺(tái)可承接各種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，包括檢測(cè)裸鼠皮下成瘤、小鼠腸炎模型構(gòu)建、糖尿病模型等實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，本文是我們?cè)诔薪訑?shù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，對(duì)操作過(guò)程中的常見問(wèn)題與大家留言咨詢最多的問(wèn)題進(jìn)行回答，快來(lái)收藏吧！

本文將詳細(xì)介紹不同類型NAFLD模型的最佳造模時(shí)間，幫助研究者準(zhǔn)確掌握從單純性脂肪肝到NASH、肝纖維化的進(jìn)展周期。

一、常見NAFLD模型造模時(shí)間對(duì)比

1. 單純性脂肪肝研究(Steatosis)

①推薦模型：普通高脂飲食(HFD)

②最佳時(shí)間：6-8周

③特征：肝細(xì)胞脂肪變性(油紅O染色陽(yáng)性)

④輕度ALT升高(約1.5-2倍)

④無(wú)顯著炎癥或纖維化

2. NASH(脂肪性肝炎)研究

⑴推薦模型：HFHC或MCD飲食

⑵最佳時(shí)間：

HFHC：12-16周

MCD：3-4周

特征：

NAS評(píng)分≥4分

明顯炎癥浸潤(rùn)(HE染色)

TNF-α、IL-6等炎癥因子升高

3.肝纖維化研究

推薦模型：HFHC+HFD或CCL4聯(lián)合

最佳時(shí)間：

HFHC：20-24周

HFD+CCL4：8-12周

特征：

天狼星紅染色陽(yáng)性

α-SMA表達(dá)增加

羥脯氨酸含量顯著升高

二、影響造模時(shí)間的關(guān)鍵因素

1.動(dòng)物品系差異

⑴C57BL/6小鼠：最常用，對(duì)高脂飲食敏感

⑵SD大鼠：需要更長(zhǎng)時(shí)間(通常比小鼠延長(zhǎng)30-50%)

2.飲食配方差異

⑴脂肪含量(40% vs 60%)

⑵是否添加膽固醇(顯著加速NASH進(jìn)展)

⑶是否聯(lián)合果糖/葡萄糖水(加重代謝異常)

3.環(huán)境因素

⑴溫度(最佳22±2℃)

⑵光照周期(建議12h/12h)

⑶飼養(yǎng)密度(每籠不超過(guò)5只)

三、造模成功的判定標(biāo)準(zhǔn)

1.基本標(biāo)準(zhǔn)

肝指數(shù)(肝重/體重)增加20%以上

血清ALT>50 U/L

肝臟TG>10 mg/g組織

2.組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)

油紅O染色陽(yáng)性面積>20%

NAS評(píng)分≥3分(脂肪變性1-3分+炎癥0-3分+氣球樣變0-2分)

3.分子標(biāo)志物

TNF-α水平升高2倍以上

α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加

五、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建議

1.時(shí)間點(diǎn)設(shè)置

至少設(shè)置3個(gè)時(shí)間點(diǎn)(如4、8、12周)

處死前禁食6小時(shí)(不禁水)

2.樣本量計(jì)算

每組至少8-10只動(dòng)物

考慮20%的損耗率

對(duì)照設(shè)置

正常飲食對(duì)照組

模型對(duì)照組

陽(yáng)性藥物對(duì)照組(如適用)

六、常見問(wèn)題解答

Q：為什么我的HFD模型8周還沒有明顯脂肪變性？

A：可能原因：

動(dòng)物品系不敏感(建議用C57BL/6)

飼料脂肪含量不足(建議≥45%)

環(huán)境溫度過(guò)高(影響代謝)

Q：MCD模型體重下降嚴(yán)重怎么辦？

A：解決方案：

縮短造模時(shí)間(2-4周)

改用MCS(膽堿缺乏但含蛋氨酸)飲食

增加監(jiān)測(cè)頻率(每周2次稱重)

Q：如何判斷纖維化是否形成？

A：金標(biāo)準(zhǔn)：

天狼星紅染色(膠原沉積)

羥脯氨酸含量測(cè)定

肝硬度檢測(cè)(如FibroScan)

七、總結(jié)與展望

掌握NAFLD模型的精準(zhǔn)造模時(shí)間是研究成功的關(guān)鍵。根據(jù)研究目的：

單純脂肪肝：HFD 6-8周

NASH：HFHC 12-16周

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纖維化：HFD+CCL4 8-12周