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EMSA實(shí)驗(yàn)結(jié)果要怎么看?

2023-04-21 10:24:05

來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)


    提問(wèn):EMSA實(shí)驗(yàn)結(jié)果要怎么看?


    普拉特澤生物分子檢測(cè)平臺(tái)專業(yè)為大家提供 EMSA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)外包服務(wù),提供真實(shí)、高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。現(xiàn)在我們來(lái)跟著技術(shù)來(lái)解決EMSA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果問(wèn)題。


    EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assay)是一種常用的核酸與蛋白質(zhì)相互作用分析技術(shù)。在EMSA實(shí)驗(yàn)中,首先將核酸標(biāo)記上放射性或非放射性物質(zhì),然后與待測(cè)的蛋白質(zhì)混合,通過(guò)電泳將蛋白質(zhì)和核酸復(fù)合體與自由的核酸單獨(dú)區(qū)分開(kāi)來(lái)。



    觀察EMSA結(jié)果需要注意以下幾點(diǎn):


    1. 稀釋序列不同:一般EMSA實(shí)驗(yàn)要設(shè)計(jì)多個(gè)稀釋序列進(jìn)行測(cè)試,而不同的序列之間它們與待測(cè)蛋白的結(jié)合能力不一定相同,所以觀察結(jié)果時(shí)要考慮稀釋系數(shù)的影響。


    2. 目標(biāo)條帶位置:如果出現(xiàn)移位,則說(shuō)明目標(biāo)蛋白可以與核酸發(fā)生結(jié)合;如果沒(méi)有移位,則表示待測(cè)樣本中可能沒(méi)有檢測(cè)到目標(biāo)蛋白或者蛋白濃度過(guò)低。


    3. 條帶密度:條帶越濃表示結(jié)合越緊密,條帶越稀表示結(jié)合不太緊密,這也需要參考實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)。


    4. 對(duì)照:要對(duì)比正對(duì)照和負(fù)對(duì)照結(jié)果,對(duì)照需要保證標(biāo)簽合成效果良好,濃度適當(dāng),鹽溶液和電泳分離條件相同。正對(duì)照要檢查核酸與目標(biāo)蛋白的結(jié)合情況是否良好,而負(fù)對(duì)照則是為了確定條帶上出現(xiàn)的帶是否真正表示放射性或非放射性標(biāo)記物與蛋白質(zhì)的結(jié)合。


總之,在觀察EMSA結(jié)果時(shí)需要注意細(xì)節(jié),以減少假陽(yáng)性或者假陰性的發(fā)生。


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