EMSA實(shí)驗(yàn)過(guò)程膜沒(méi)有一直處于濕潤(rùn)狀態(tài)怎么辦?
來(lái)源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
普拉特澤生物為廣大生命科學(xué)研究人員提供EMSA實(shí)驗(yàn),可根據(jù)實(shí)方案的要求選擇不同的檢測(cè)方法,本文就跟大家一起繼續(xù)探究EMSA實(shí)驗(yàn)過(guò)程膜沒(méi)有一直處于濕潤(rùn)狀態(tài)怎么辦的問(wèn)題~~
在EMSA實(shí)驗(yàn)中,保持膜處于潮濕的狀態(tài)非常重要,因?yàn)橐坏┠じ稍?,核酸和蛋白質(zhì)即使結(jié)合了也難以形成準(zhǔn)確的電泳遷移帶。以下是關(guān)于如何保持EMSA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中膜處于潮濕狀態(tài)的建議:
1. 在制備探針、裂解細(xì)胞等操作之前,先將儀器、坩堝、電泳室等與0.5X TBE預(yù)冷卻并抹干表面,確保不會(huì)有多余的水滴污染試樣。
2. 在準(zhǔn)備反應(yīng)混合物時(shí)保持迅速操作。每次加入組分后立即輕輕搖動(dòng)樣品管,將探針盡快構(gòu)建復(fù)合物并防止在混合物與蛋白質(zhì)溶液之間產(chǎn)生空氣缺陷。
3. 經(jīng)過(guò)電泳后,打開電泳槽蓋子,用吸水紙輕輕拍干之前被液體封蓋的探針上覆蓋物的外側(cè),將多余的液滴從膜表面吸走。
4. 如果您長(zhǎng)時(shí)間無(wú)法進(jìn)行下一個(gè)步驟,請(qǐng)?jiān)谙鄬?duì)潮濕環(huán)境下用濕滴頭蓋好燒杯或樣品管中的反應(yīng)液,并密封冷藏。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將帶有反應(yīng)混合物的膜立即轉(zhuǎn)移到濕濾紙上并加蓋保鮮膜,避免其完全干燥。
綜上所述,在EMSA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡可能將探針/樣品置于潮濕環(huán)境內(nèi),以防止膜的干燥。這可以通過(guò)快速操作、用紙巾輕輕拍干膜表面等方式進(jìn)行有效地實(shí)現(xiàn)。
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