Dot Blot實驗和western blot實驗有何區(qū)別?
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
提問:Dot Blot實驗和western blot實驗有何區(qū)別?
Dot Blot和Western Blot是兩種檢測目標(biāo)蛋白質(zhì)存在的常用方法。它們之間有以下區(qū)別
1. 基本原理:Dot Blot實驗在膜上直接滴點分析樣品中是否存在特定蛋白質(zhì),而Western Blot實驗先通過SDS-PAGE將樣品中的蛋白質(zhì)進行分
離,再根據(jù)特異性抗體來檢測某個具體的蛋白質(zhì)。
2. 操作難度:相比較Western Blot, Dot Blot相對容易進行,縮短了實驗周期和操作時間。
3. 靈敏度:Western Blot方法比Dot Blot更為靈敏,并且可以提供分子量等更具精度的信息; 而當(dāng)需要非常高的靈敏度時,摸索Dot Blot實驗是一個更好的選擇,因為Westem blot 分析所需的蛋白質(zhì)數(shù)量,通常至少為Dot Blot實驗所需的10倍。
4. 樣品來源及基質(zhì)構(gòu)成限制:由于Dot Blot不需要對蛋白進行電泳分離,所以幾乎可以用任何類型的樣品及其提取物,對于卡路里較低的無脂血清及其他時要求不影響蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)配合的實驗,這一特點尤其重要。
總之,根據(jù)實際需要和操作現(xiàn)實性進行選擇。當(dāng)需要驗證特定蛋白質(zhì)的存在或數(shù)量時,Dot Blot是更為常規(guī)的方法;而當(dāng)時間成本較高或者所需樣品有限時,則可以選擇Dot Blot實驗。
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