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        組織樣本單細(xì)胞懸液制備方法由普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺分享，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺專為大家提供各類細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。單細(xì)胞懸液是把組織塊或貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞消化吹打以后形成的懸液，使粘連的細(xì)胞都分開。本文咱們就以組織樣本為例，為大家介紹單細(xì)胞懸液的制作方法。

        一、單細(xì)胞懸液組織樣本

        1、常見的組織類型：??脾臟、肝臟、?臟、肺臟、腦組織、腫瘤組織、?腫瘤組織、?膚組織等

        2、傳統(tǒng)組織處理?法：機(jī)械法：?搓法、研磨法

        3、適?樣本類型：脾臟、淋巴結(jié)、胸腺

        二、各樣本處理方法操作步驟

        1、?搓法

        （1）將300?尼龍?扎在?菌的?燒杯上；

        （2）把剪碎的組織放在?上，以眼科鑷?輕輕搓組織塊，邊搓邊加?理鹽?沖洗，直到將組織搓完；

        （3）收集細(xì)胞懸液于離?管中， 1500rpm離?5 min；棄上清液，加紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀，室溫作?5 min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離?5 min，棄上清，?PBS洗滌?次，再?PBS重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)后即可使?。

        2、研磨法

        （1）先將組織剪成1-2mm??組織塊；

        （2）放?組織研磨器中，轉(zhuǎn)動(dòng)研棒，研?勻漿；

        （3）加?10ml?理鹽?，沖洗研磨器；

        （4）收獲細(xì)胞懸液，并經(jīng)200?尼龍?過濾，1500rpm離?5 min；

        （5）棄上清液，加紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀，室溫作?5min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離?5 min，棄上清，?PBS洗滌?次，再?PBS重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)后即可使?。

        3、酶解法：胰蛋?酶類、膠原酶、溶菌酶、彈性蛋?酶

        適?樣本類型：肝臟、腎臟、?臟、肺臟、脊髓、腦、腸道、?膚、腫瘤等；

        三、組織樣本單細(xì)胞懸液制作操作步驟

        1、先將組織剪成泥狀。

        2 、?胰蛋?酶或膠原酶消化組織塊。

        胰蛋?酶適?于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織，如胚胎、上?、肝、腎等組織。胰蛋?酌?作濃度?般為 0. 1 %—0 . 5 % 。對于纖維較多的組織或較硬的癌組織常?0 . 25 %膠原酶，膠原酌對組織中膠原蛋?類結(jié)構(gòu)消化作?強(qiáng)，它僅對細(xì)胞間質(zhì)有消化作??對上?細(xì)胞影響不?。膠原酶常?濃度為 0 . 1—0 . 3ug / ml ，??于組織量30—50 倍的胰蛋?酶液或膠原酶液在 37°C ，搖床上消化組織，消化時(shí)間的長短依組織類型?定，?般來說，胰蛋?酶油作? 20—60 min，膠原酶需1—4h左右，?般還會(huì)加?DNA核酸內(nèi)切酶。

        3、消化完畢后，將細(xì)胞懸液通過200?孔徑尼龍?過濾，以除掉未充分消化的組織；

        4、已過濾的細(xì)胞懸液經(jīng)1500rpm離?5 min后，棄上清液，加紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀，室溫作?5 min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離?5 min，棄上清，?PBS洗滌?次，再?PBS重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)后即可使?。

        好啦，那關(guān)于組織樣本的單細(xì)胞懸液制備方法就講完啦，如果您也在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上有什么不懂的問題或有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包的需求歡迎隨時(shí)聯(lián)系~