cck8檢測(cè)原理和實(shí)驗(yàn)步驟
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
CCK-8(Cell Counting Kit-8)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是一種廣泛用于評(píng)估細(xì)胞生存率和細(xì)胞增殖能力的試劑盒。
CCK-8檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理是基于其反應(yīng)機(jī)制,基于細(xì)胞線粒體呼吸活性的變化,即細(xì)胞內(nèi)還原劑可以將CCK-8試劑內(nèi)的三唑基四氮唑(WST-8)還原成有色產(chǎn)物。這種有色
產(chǎn)物可以通過吸光度測(cè)量的方式進(jìn)行定量分析,從而評(píng)估細(xì)胞數(shù)量和代謝活性。
以下是CCK8檢測(cè)的步驟:
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1.培養(yǎng)細(xì)胞:將需要檢測(cè)的細(xì)胞分裝到培養(yǎng)皿中,添加培養(yǎng)液,使其繼續(xù)生長(zhǎng)和分裂。
2.處理藥物:將需要檢測(cè)的藥物按照一定的濃度加入培養(yǎng)液中,使其與細(xì)胞接觸。
3.添加CCK8試劑:在一定時(shí)間后,將CCK8試劑加入培養(yǎng)液中,使其與細(xì)胞接觸。
4.孵育:將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中,孵育一定時(shí)間,使CCK8試劑與細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)。
5.測(cè)量:測(cè)量培養(yǎng)皿中吸光度的變化,可以通過酶標(biāo)儀等設(shè)備測(cè)定吸光度值,計(jì)算出細(xì)胞的增殖率和毒性。
CCK8試劑中含有水溶性四唑鹽(WST-8)和電子傳遞介體1-甲基三唑基甲烷(MTT)類似,它可以被細(xì)胞內(nèi)線粒體呼吸鏈中的酶還原成橙色產(chǎn)物,這個(gè)橙色產(chǎn)物的含
量與細(xì)胞數(shù)量和代謝活性有關(guān),因此可以通過檢測(cè)橙色產(chǎn)物的濃度來判斷細(xì)胞的增殖率和毒性。
CCK-8試劑盒中的WST-8是一種水溶性化合物,在存在還原劑(如NADH、NADPH等)的情況下,可以被還原成高度水溶性的有色產(chǎn)物formazan。這種產(chǎn)物的形成與細(xì)胞
代謝活性相關(guān),因此可以用于定量評(píng)估細(xì)胞增殖和存活率。
總體而言,CCK-8試劑盒是一種方便、快速和準(zhǔn)確的細(xì)胞代謝活性評(píng)估工具,適用于各種細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。