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         今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是——冰凍切片的操作步驟。冰凍切片的操作分享由普拉特澤生物病理實驗平臺技術(shù)總結(jié)分享，病理實驗平臺自成立承接組織冰凍切片外包實驗數(shù)百例，冰凍切片制作實操熟練、病理閱片分析專業(yè)，積累了多種動植物組織切片案例，歡迎各科研人員留言和技術(shù)們友好交流~

        冰凍切片操作步驟一：取材

        要進(jìn)行冰凍切片觀察的組織，應(yīng)盡可能采取新鮮的材料，防止組織發(fā)生死后變化，影響后期染色分析結(jié)果。

        冰凍切片的步驟二：速凍

        1、將取好的組織塊平放于軟塑瓶蓋或特制小盒內(nèi)（直徑約2 cm）。

        2、如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織，將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內(nèi)。

        3、當(dāng)盒底部接觸液氮時即開始?xì)饣序v，此時小盒保持原位切勿浸入液氮中，大約10-20 s組織即迅速冰結(jié)成塊。

        4、再制成凍塊，使其可置入恒冷箱切片機冰凍切片。

        5、若需要保存，應(yīng)快速以鋁箔或塑料薄膜封包，立即置入-80 ℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/span>

       冰凍切片的步驟三：固定

        1、樣品托上涂一層OCT包埋膠，將速凍組織置于其上，4℃冰箱預(yù)冷5-10 min讓OCT膠浸透組織。

        2、取下組織置于錫箔或者玻片上，樣品托速凍。

        3、組織置于樣品托上，其上再添一層OCT膠，以完全覆蓋為宜，速凍架（PE）上30 min。

        冰凍切片的步驟四：切片

        1、恒溫冰凍切片機為較理想的冰凍切片機，其基本結(jié)構(gòu)是將切片機置于低溫密閉室內(nèi)，故切片時不受外界溫度和環(huán)境影響，可連續(xù)切薄片至5-10 μm。

        2、切片時，低溫室內(nèi)溫度以-15℃ ~ -20℃為宜，溫度過低組織易破碎，抗卷板的位置及角度要適當(dāng)，載玻片附貼組織切片，切勿上下移動。

        3、切好后，室溫放置30 min后，入4℃丙酮固定5-10 min，烘箱干燥20 min。PBS洗5 min×3。

        4、進(jìn)行抗原熱修復(fù)，微波熱修復(fù)也可，室溫自然冷卻?？捎?/span>3%H2O2孵育5-10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性

   好了，冰凍切片的實驗步驟我們就講完了，想學(xué)習(xí)冰凍切片制作的、對冰凍切片步驟有疑問的、需要普拉特澤生物代做冰凍切片的同學(xué)歡迎留言哦~