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        普拉特澤生物為廣大生命科學(xué)研究人員提供血管形成實(shí)驗(yàn)，可根據(jù)實(shí)方案的要求選擇不同的檢測(cè)方法，本文就跟大家一起繼續(xù)深入學(xué)習(xí)下血管形成實(shí)驗(yàn)操作步驟。

一、實(shí)驗(yàn)原理

    血管生長是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長直徑超過1~2 mm，都會(huì)有血管生成，這是由于腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長因子，誘導(dǎo)血管生成。多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速，因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。體外的血管生成實(shí)驗(yàn)?zāi)芎芎玫哪M腫瘤的血管發(fā)生過程，并且適合研究藥物對(duì)這一過程的影響。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 細(xì)胞復(fù)蘇
(1) 將ddH2O預(yù)溫至37℃。
(2) 戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細(xì)胞的凍存管（內(nèi)有1 mL細(xì)胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內(nèi)快速溶解。
(3) 完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進(jìn)超凈臺(tái)。
(4) 在超凈臺(tái)中，在15 mL滅菌離心管中預(yù)先加入10 mL新鮮配制的培養(yǎng)基，打開凍存管，將所有凍融的細(xì)胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養(yǎng)液。
(5) 1mL培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)基至5 mL，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
(6) 48小時(shí)后換液，細(xì)胞融合接近80%時(shí)即可傳代。
7.2 細(xì)胞培養(yǎng)
內(nèi)皮細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基在37℃飽和濕度、含5%CO2
的孵箱中培養(yǎng)。
7.3 血管形成實(shí)驗(yàn)
(1) 用預(yù)冷的槍頭吸取100μL基質(zhì)膠加入96孔板中，培養(yǎng)箱靜置1h，待其凝固；
(2) 取數(shù)生長期，生長狀態(tài)良好的各組細(xì)胞用0.25%胰酶消化后，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算后，按照密度為2×104個(gè)細(xì)胞/孔，同時(shí)按實(shí)驗(yàn)設(shè)置添加藥物處理。
(3)  4-6h觀察成管情況。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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