腦缺血模型造模步驟—上【腦缺血模型外包】
2022-10-26 16:38:42
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
腦缺血模型/缺血再灌注模型實(shí)驗(yàn)步驟由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，歡迎留言指正。目前，腦缺血模型普遍采用國際上廣泛認(rèn)可的大腦中動脈栓塞模型（MCAO），其發(fā)病機(jī)理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對于制作模擬人腦缺血模型對腦缺血發(fā)病機(jī)制及藥物篩選有重要意義。普拉特澤生物動物實(shí)驗(yàn)平臺專業(yè)為科研人員提供腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ屯獍c代做服務(wù)，希望能為廣大科研人員提供科研道路上的一點(diǎn)幫助。
本文就來跟大家分享，大腦中動脈栓塞模型（MCAO）的詳細(xì)造模介紹與步驟：
一般采用雄性SD大鼠即可，手術(shù)成功率也比較高，小鼠也是可行的，但是栓線的型號和進(jìn)入的深度不同）?？紤]大鼠雌激素水平對腦缺血損傷可能的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制及激素水平的生理性波動對大鼠情緒的影響，采用血管解剖結(jié)構(gòu)更為清晰的雄性SD大鼠作為MCAO的動物模型。大鼠大腦中動脈的長度和粗細(xì)與其體重形成正比，目前多主張大鼠體重控制在250-300g。
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、樣本準(zhǔn)備：6-8周雄性SD大鼠12只
2、實(shí)驗(yàn)分組：Sham組3只；再灌注6H組3只；再灌注24H組3只；再灌注48H組3只
3、實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：手術(shù)剪、手術(shù)鑷、線栓、縫合針、縫合線、棉線
二、腦缺血造模實(shí)驗(yàn)操作步驟
1、術(shù)前12小時(shí)大鼠禁食，自由進(jìn)水。
2、3 %戊巴比妥鈉按60 mg/kg劑量由腹腔注射進(jìn)行麻醉。
3、待大鼠麻醉后采取仰臥位固定于操作臺。
4、于頸正中作一縱向切口，仔細(xì)分離肌肉，暴露出右側(cè)頸總動脈、頸外動脈和頸內(nèi)動脈。
5、小心分離血管周圍的神經(jīng)組織，用棉線在頸外動脈的遠(yuǎn)心端做永久結(jié)扎，在頸總動脈近心端和頸內(nèi)動脈做臨時(shí)結(jié)扎。
6、自頸外動脈遠(yuǎn)心端剪開一個(gè)小口，將線栓從頸外動脈經(jīng)過頸總動脈送入頸內(nèi)動脈，當(dāng)線栓上的黑色標(biāo)志剛過頸總動脈的分叉口顯示在頸內(nèi)動脈處時(shí)，停止下送線栓。
7、將線栓連同頸外動脈一起臨時(shí)結(jié)扎，缺血2 H后將線栓拔出頸內(nèi)動脈（不要完全拔出），松開頸總動脈的臨時(shí)結(jié)扎恢復(fù)供血。
8、再灌注6/24/48 H后處死大鼠，將腦組織取出后分成6份，1份凍存?zhèn)溆?，其?/span>5份進(jìn)行TTC染色。
9、Sham組大鼠進(jìn)行頸部皮膚切開與血管分離后不做下線栓處理，直接縫合。
三、腦缺血造模實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、栓線的直徑和線頭是否光滑？
因?yàn)樗苯雨P(guān)系到進(jìn)線的難度和手術(shù)時(shí)間。栓線直徑必須要考慮到動物的體重，不同體重的動物進(jìn)線深度不同。所以保證動物體重基本一致，提前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定進(jìn)線深度是非常有必要的。
2、栓線不可過硬。
過硬線栓容易找手感，但是容易出現(xiàn)刺破蛛網(wǎng)膜下腔血管，導(dǎo)致顱內(nèi)出血。同時(shí)過硬線栓還會改變血管自然形態(tài)，當(dāng)線栓插入血管以后，因?yàn)榫€栓過硬，血管肌張力無法使得線栓改變形態(tài)，只能被線栓改變形態(tài)，導(dǎo)致血管處于緊繃狀態(tài)，對于再灌注操作不利。
3、栓線插入深度？
許多文獻(xiàn)報(bào)道插入深度為18.5±0.5mm（270g左右大鼠），具體的長度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際操作進(jìn)行調(diào)整，18.5mm并不是標(biāo)準(zhǔn)。總之，以遇到輕微的阻力為準(zhǔn)，此時(shí)栓線正好進(jìn)入顱內(nèi)的大腦前動脈，阻塞大腦中動脈的開口。建議當(dāng)插線近18mm（做上標(biāo)記）時(shí)，注意手的感覺，輕緩?fù)七M(jìn)，直至感覺到阻力為止（當(dāng)遇到阻力后，再插線會見到線彎曲）
4、不同亞型鼠，如Wistar大鼠、F344大鼠或SD大鼠，它們的腦血管解剖和缺血敏感性不同。同樣的操作，Wistar大鼠腦梗死面積較小，F344大鼠腦梗死面積最大，SD大鼠居中。因此，正式試驗(yàn)前確定好大鼠種類也是比較重要的。
5、血糖濃度高或低均可加重腦損傷，增加梗死面積，加重腦水腫，增大梗死后出血率。因此有必要監(jiān)測和報(bào)告血糖指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)前12h～24h動物禁食是防止血糖升高的有效手段。
6、最好能夠?qū)崟r(shí)觀測顱腦血流情況。這樣可以準(zhǔn)確判斷線栓是否阻塞 MCA，一旦血流灌注量下降超過70%，即代表線栓阻塞MCA。
那最常用的MCAO模型我們就講完啦，和你的操作步驟有沒有什么不同的呢？有任何不懂的問題歡迎隨時(shí)留言給技術(shù)為您答疑解惑。如果您有腦缺血模型外包代做的需求歡迎選擇普拉特澤生物~
——關(guān)于我們——
普拉特澤自建3000平米的GMP級實(shí)驗(yàn)室
擁有七個(gè)大型實(shí)驗(yàn)平臺、碩博士學(xué)歷技術(shù)團(tuán)隊(duì)100余人
病理實(shí)驗(yàn)平臺、動物實(shí)驗(yàn)平臺、流式檢測平臺、分子檢測中心、細(xì)胞病毒中心,三大資源庫（細(xì)胞、組織、質(zhì)粒）
秉承“死磕真實(shí)實(shí)驗(yàn)”學(xué)術(shù)精神提供各項(xiàng)優(yōu)質(zhì)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
歡迎您交流咨詢
電話：400-691-6686
在線時(shí)間：8:00-24:00
微信關(guān)注公眾號
湘公網(wǎng)安備