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—— 從造模到數(shù)據(jù)分析的全流程關(guān)鍵點(diǎn)

    非酒精性脂肪肝（NAFLD）動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)專業(yè)承接裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)外包、動(dòng)物造模等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)，積累專業(yè)豐富的實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)。
上期我們分享非酒精性脂肪肝NAFLD模型常見問(wèn)題及解決方案后大家都說(shuō)不夠詳細(xì)，有一些注意事項(xiàng)沒有寫出來(lái)
那今天咱們就為大家專門出一期非酒精性脂肪肝（NAFLD）動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)，快點(diǎn)學(xué)起來(lái)吧！

通過(guò)之前的學(xué)習(xí)我們都知道建立穩(wěn)定的非酒精性脂肪肝（NAFLD）動(dòng)物模型是研究該疾病發(fā)病機(jī)制及藥物療效的關(guān)鍵步驟。然而，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常因操作不當(dāng)、模型選擇錯(cuò)誤或數(shù)據(jù)采集不規(guī)范導(dǎo)致結(jié)果不可靠。
本期系統(tǒng)梳理NAFLD模型實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵注意事項(xiàng)，幫助研究者提高實(shí)驗(yàn)成功率，減少誤差。

一、模型選擇：匹配研究目標(biāo)是成功的第一步

1. 不同研究目的的最佳模型選擇

單純脂肪變性研究：高脂飲食(HFD)12-16周

NASH(炎癥+脂肪變性)研究：MCD飲食4-6周或HFHFrHC飲食20-30周

纖維化研究：HFHFrHC+低劑量CCL4(0.2mL/kg/周)

專家建議：基因修飾模型(如ob/ob小鼠)適合代謝研究，但需結(jié)合飲食干預(yù)才能誘導(dǎo)NASH！

二、動(dòng)物選擇：這些細(xì)節(jié)決定實(shí)驗(yàn)成敗

2. 品系與性別的科學(xué)選擇

①首選品系：C57BL/6(對(duì)高脂飲食最敏感)

②性別差異：雄性更易形成脂肪肝(雌性需去卵巢或延長(zhǎng)造模時(shí)間30%)

③周齡控制：8-12周齡小鼠，同批次年齡差≤3天

④實(shí)驗(yàn)證明：年齡差異過(guò)大會(huì)導(dǎo)致代謝指標(biāo)波動(dòng)高達(dá)25%！

三、飼養(yǎng)管理：不可忽視的環(huán)境因素

3. 飼料選擇與保存要點(diǎn)

①HFD配方：60%脂肪(推薦Research Diets D12492)

②MCD飲食：短期造?？?但需密切監(jiān)測(cè)體重)

③保存條件：-20℃密封，開封后2周內(nèi)用完

4. 標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)環(huán)境

①溫濕度控制：22±1℃，50-60%濕度

②光照周期：固定12h/12h光暗循環(huán)

③飼養(yǎng)方式：代謝研究建議單籠飼養(yǎng)

④數(shù)據(jù)警示：溫度波動(dòng)超過(guò)2℃可使肝脂含量差異達(dá)15%！

四、實(shí)驗(yàn)操作：這些步驟最容易出錯(cuò)

5. 標(biāo)準(zhǔn)化取材流程

①禁食處理：統(tǒng)一禁食6小時(shí)

②取材時(shí)間：固定上午9-11點(diǎn)(減少晝夜影響)

③樣本處理：離體5分鐘內(nèi)液氮速凍

6. 肝臟樣本處理方法

分區(qū)取材：左葉生化檢測(cè)，右葉病理分析

固定選擇：

石蠟切片：4%多聚甲醛固定24h

冰凍切片：OCT包埋-80℃保存

經(jīng)驗(yàn)分享：取材時(shí)間不統(tǒng)一可使ALT值波動(dòng)30%以上！

五、檢測(cè)指標(biāo)：多維度驗(yàn)證模型成功

7. 必測(cè)基礎(chǔ)指標(biāo)

體重/肝重比：增加≥30%表明模型成功

肝功能：ALT/AST>1提示脂肪性肝炎

胰島素抵抗：HOMA-IR指數(shù)增加2倍

8. 組織學(xué)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

H&E染色：NAS評(píng)分(脂肪變性+炎癥+氣球樣變)

天狼星紅：纖維化分期(Ishak/METAVIR)

油紅O：脂肪變性定量(ImageJ分析)

六、常見問(wèn)題：這些坑千萬(wàn)別踩

9. 模型不成功的解決方案

脂肪變性不明顯：

? 檢查飼料是否氧化

? 延長(zhǎng)造模至16周以上

炎癥評(píng)分低：

? 增加1-2%膽固醇

? 改用HFHFrHC飲食

纖維化不穩(wěn)定：

? 結(jié)合CCL4干預(yù)

? 延長(zhǎng)至24周以上

10. 數(shù)據(jù)可重復(fù)性保障

①內(nèi)參對(duì)照：β-actin+GAPDH雙內(nèi)參

②技術(shù)重復(fù)：每個(gè)樣本≥3次重復(fù)

③陽(yáng)性對(duì)照：每批實(shí)驗(yàn)設(shè)置參考樣本

④發(fā)表必備：論文中必須注明動(dòng)物品系、周齡、飼料配方等關(guān)鍵信息！

七、前沿技術(shù)：提升研究水平的新選擇

⒈活體成像技術(shù)：MRI-PDFF無(wú)創(chuàng)檢測(cè)肝脂含量

⒉單細(xì)胞測(cè)序：解析NAFLD肝細(xì)胞異質(zhì)性

⒊空間轉(zhuǎn)錄組：定位脂肪變性相關(guān)基因表達(dá)

總結(jié)：NAFLD模型成功的黃金法則

① 精準(zhǔn)匹配：根據(jù)研究目的選擇最佳模型

②嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化：從飼養(yǎng)到取材全程控制

③多維度驗(yàn)證：代謝+病理+分子三位一體

④數(shù)據(jù)嚴(yán)謹(jǐn)性：設(shè)對(duì)照+重復(fù)+盲法評(píng)估

掌握這些關(guān)鍵點(diǎn)，你的NAFLD研究將更具說(shuō)服力和可重復(fù)性！建議立即收藏起來(lái)做NAFLD模型實(shí)驗(yàn)的備用可以直接聯(lián)系我們：18570028002 或 微信 pulateze666會(huì)把這些資料發(fā)送給大家哦。